| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 他汀类药物简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 他汀类药物简介 | 第12页 |
| 1.1.2 他汀类药物药理作用 | 第12-13页 |
| 1.2 国内外合成他汀类药物手性β,δ-二羟基部分研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 他汀类药物手性β,δ-二羟基部分化学法合成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 他汀类药物手性β,δ-二羟基部分生物法合成 | 第14-16页 |
| 1.3 羰基还原酶在不对称还原合成手性药物中的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 不对称还原过程中辅酶原位再生 | 第17-20页 |
| 1.4.1 游离酶辅酶再生 | 第18-19页 |
| 1.4.2 全细胞辅酶再生 | 第19-20页 |
| 1.4.3 固定化酶辅酶再生 | 第20页 |
| 1.5 重组大肠杆菌分批与分批培养的研究 | 第20-23页 |
| 1.5.1 重组大肠杆菌的构建 | 第21页 |
| 1.5.2 培养基培养条件 | 第21-22页 |
| 1.5.3 培养方式 | 第22页 |
| 1.5.4 抑制性代谢产物乙酸的累积 | 第22-23页 |
| 1.6 本论文研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 羰基还原酶-葡萄糖脱氢酶共表达菌株的诱导产酶条件的研究 | 第24-34页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第25页 |
| 2.3.2 粗酶液制备方法 | 第25页 |
| 2.3.3 羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶酶活测定方法 | 第25-26页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第26页 |
| 2.3.5 E. coli BL21(DE3)/pET-28a-cr-X、E. coliBL21(DE3)/pCDFDuet-gdh-cr-X重组大肠杆菌不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯的研究 | 第26页 |
| 2.3.6 生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.7 摇瓶培养IPTG诱导产酶条件的研究 | 第27页 |
| 2.3.8 分析方法 | 第27-29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-32页 |
| 2.4.1 SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第29页 |
| 2.4.2 E.coli BL21(DE3)/pET-28a-cr-X、E.coliBL21(DE3)/pCDFDuet-gdh-cr-X重组大肠杆菌不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯的研究 | 第29-30页 |
| 2.4.3 E.coli BL21(DE3)/pCDFDuet-gdh-cr-X菌株摇瓶生长曲线测定 | 第30页 |
| 2.4.4 E.coli BL21(DE3)/pCDFDuet-gdh-cr-X菌株摇瓶培养IPTG诱导产酶条件的研究 | 第30-32页 |
| 2.5 本章小结 | 第32-34页 |
| 第三章 羰基还原酶-葡萄糖脱氢酶共表达菌株5L发酵罐培养条件的研究 | 第34-45页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第34页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第35页 |
| 3.3.2 静息细胞酶活测定方法 | 第35-36页 |
| 3.3.3 生物量的测定 | 第36页 |
| 3.3.4 葡萄糖的测定 | 第36页 |
| 3.3.5 分批发酵诱导剂种类的研究 | 第36-37页 |
| 3.3.6 补料发酵的研究 | 第37页 |
| 3.3.7 分析方法 | 第37页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第37-43页 |
| 3.4.1 生物量测定 | 第37-38页 |
| 3.4.2 摇瓶培养诱导剂种类的研究 | 第38-39页 |
| 3.4.3 5L发酵罐诱导剂种类的研究 | 第39-40页 |
| 3.4.4 5L发酵罐诱导时机的研究 | 第40-42页 |
| 3.4.5 补料培养的研究 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 第四章 羰基还原酶-葡萄糖脱氢酶共表达菌株不对称催化合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯及其结构验证 | 第45-62页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第45-46页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-52页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第46页 |
| 4.3.2 重组细胞冻干粉制备方法 | 第46页 |
| 4.3.3 分析方法 | 第46-48页 |
| 4.3.4 共表达菌株不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的研究 | 第48-50页 |
| 4.3.5 静息细胞热稳定性研究 | 第50页 |
| 4.3.6 静息细胞重复利用率的研究 | 第50页 |
| 4.3.7 6-氰基-(3,5R)-二羟基己酸叔丁酯的制备及萃取 | 第50-51页 |
| 4.3.8 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯双羟基保护合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基-3,5-O-亚异丙基己酸叔丁酯的研究 | 第51页 |
| 4.3.9 6-氰基-(3R,5R)-二羟基-3,5-O-亚异丙基己酸叔丁酯的精制 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-61页 |
| 4.4.1 反应体系葡萄糖浓度对反应的影响 | 第52页 |
| 4.4.2 反应体系pH值对反应的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.3 反应体系温度对反应的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.4 反应体系底物浓度对反应的影响 | 第54页 |
| 4.4.5 NADP~+浓度对反应的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.6 菌体浓度对反应的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.7 利用冻干细胞催化合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的研究 | 第56-57页 |
| 4.4.8 静息细胞热稳定性的研究 | 第57页 |
| 4.4.9 静息细胞重复利用率的研究 | 第57-58页 |
| 4.4.10 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的萃取 | 第58页 |
| 4.4.11 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯双羟基保护合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基-3,5-O-亚异丙基己酸叔丁酯的研究 | 第58-60页 |
| 4.4.12 6-氰基-(3R,5R)-二羟基-3,5-O-亚异丙基己酸叔丁酯的精制 | 第60页 |
| 4.4.13 6-氰基-(3R,5R)-二羟基-3,5-O-亚异丙基己酸叔丁酯单晶衍射分析 | 第60-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62-63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第71页 |
