| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一章 实验材料 | 第16-19页 |
| 1.虫株及细胞系 | 第16页 |
| 2.主要试剂 | 第16-17页 |
| 3.主要耗材 | 第17-18页 |
| 4.主要仪器 | 第18-19页 |
| 第二章 实验方法 | 第19-41页 |
| 1.实验细胞及实验虫株培养 | 第19-20页 |
| 1.1 HFFs细胞培养 | 第19页 |
| 1.2 RH株、RHΔKu80ΔHXGPRT株弓形虫培养 | 第19-20页 |
| 2.Puf在RH株弓形虫mRNA水平验证及速缓殖子间差异 | 第20-24页 |
| 2.1 弓形虫总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2 RT-PCR实验 | 第21-22页 |
| 2.3 PCR产物回收并进行测序验证 | 第22-23页 |
| 2.4 弓形虫RH株缓殖子诱导实验 | 第23-24页 |
| 2.5 RT-qPCR实验 | 第24页 |
| 3.TgPuf2-HA转基因虫株构建及其亚细胞定位 | 第24-34页 |
| 3.1 不依赖于连接反应克隆(LIC)实验 | 第24-27页 |
| 3.2 质粒中提 | 第27-28页 |
| 3.3 转染实验 | 第28-30页 |
| 3.4 单克隆挑选 | 第30-31页 |
| 3.5 Western Blot实验 | 第31-32页 |
| 3.6 免疫荧光实验 | 第32-34页 |
| 4.TgPuf2RNA结合功能探索-一 | 第34-39页 |
| 4.1 Puf2结构域RT-PCR扩增 | 第34页 |
| 4.2 融合表达蛋白 | 第34-35页 |
| 4.3 IPTG诱导蛋白表达并验证 | 第35-37页 |
| 4.4 重组蛋白rTgPuf2-His纯化收集 | 第37-38页 |
| 4.5 体外RNA结合实验 | 第38-39页 |
| 5.TgPuf2RNA结合功能探索-二 | 第39-41页 |
| 5.1 收集TgPuf2-HA转基因虫株 | 第39页 |
| 5.2 免疫共沉淀实验 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-49页 |
| 1.实验虫株急性感染细胞模型建立 | 第41页 |
| 2.弓形虫RH株存在Puf2基因及其在速缓殖子间差异表达 | 第41-43页 |
| 3.TgPuf2-HA转基因虫株构建及其亚细胞定位 | 第43-46页 |
| 4.重组蛋白rTgPuf2-His纯化收集 | 第46-49页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
