| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 DNA检测和基因分型概述 | 第11-12页 |
| 1.2 CRISPR技术研究现状 | 第12-18页 |
| 1.2.1 CRISPR技术简介 | 第12-15页 |
| 1.2.2 CRISPR技术的应用 | 第15-18页 |
| 1.3 人乳头瘤病毒概述及其常用检测技术 | 第18-22页 |
| 1.3.1 人乳头瘤病毒概述 | 第18-19页 |
| 1.3.2 人乳头瘤病毒检测及分型方法研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4 本论文的研究目的和内容 | 第22-25页 |
| 第二章 Cas9/sgRNA体内切割HPV L1基因片段 | 第25-35页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 构建靶向HPV L1基因的Cas9载体 | 第25-28页 |
| 2.2.2 制备靶标HPV感受态细胞 | 第28-29页 |
| 2.2.3 评价靶向HPV L1基因的Cas9载体切割效果 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-34页 |
| 2.3.1 鉴定靶向HPV L1基因的Cas9载体 | 第29-30页 |
| 2.3.2 靶向HPV L1基因的Cas9载体质粒的提取及检测 | 第30-32页 |
| 2.3.3 靶向HPV L1基因的Cas9载体的切割效果 | 第32-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 建立ctPCR体系 | 第35-53页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 3.2.1 引物的设计合成 | 第36-37页 |
| 3.2.2 T adaptor序列退火反应 | 第37页 |
| 3.2.3 制备sgRNA | 第37-38页 |
| 3.2.4 pHPV质粒的提取及检测 | 第38-39页 |
| 3.2.5 Cas9/sgRNA体外切割 | 第39-40页 |
| 3.2.6 建立ctPCR体系 | 第40-42页 |
| 3.2.7 ctPCR检测pHPV质粒灵敏度 | 第42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-51页 |
| 3.3.1 pHPV16/18质粒和pHPV16/18 L1DNA的检测 | 第42-43页 |
| 3.3.2 sgRNA电泳检测 | 第43-44页 |
| 3.3.3 Cas9/sgRNA体外切割 | 第44-45页 |
| 3.3.4 建立ctPCR体系 | 第45-49页 |
| 3.3.5 ctPCR检测HPV质粒灵敏度 | 第49-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第四章 ctPCR检测gDNA | 第53-71页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-59页 |
| 4.2.1 引物的设计合成 | 第54页 |
| 4.2.2 T adaptor序列退火反应 | 第54-55页 |
| 4.2.3 制备sgRNA | 第55-56页 |
| 4.2.4 培养宫颈癌细胞及gDNA的提取与检测 | 第56-57页 |
| 4.2.5 检验sgRNA特异性 | 第57页 |
| 4.2.6 ctPCR检测宫颈癌细胞gDNA | 第57-58页 |
| 4.2.7 qPCR-ctPCR检测临床样品gDNA | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-70页 |
| 4.3.1 sgRNA电泳检测 | 第59-60页 |
| 4.3.2 宫颈癌细胞gDNA电泳检测 | 第60-61页 |
| 4.3.3 12种高危型pHPV质粒的检测结果 | 第61-62页 |
| 4.3.4 检验sgRNA特异性 | 第62-63页 |
| 4.3.5 ctPCR检测宫颈癌细胞gDNA | 第63-68页 |
| 4.3.6 ctPCR检测临床样品gDNA | 第68-70页 |
| 4.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第五章 工作总结与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 作者简介 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
