| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.1 细胞自噬与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.1.1 细胞自噬概述 | 第15页 |
| 1.1.2 细胞自噬过程 | 第15-16页 |
| 1.1.3 细胞自噬与肿瘤治疗 | 第16页 |
| 1.2 Beclin1与肿瘤 | 第16-18页 |
| 1.2.1 Beclin1概述 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Beclin1与肿瘤发生 | 第17页 |
| 1.2.3 Beclin1用于肿瘤治疗 | 第17-18页 |
| 1.2.4 Beclin1用于肿瘤治疗的局限性 | 第18页 |
| 1.3 肿瘤酸性微环境与pHLIP | 第18-20页 |
| 1.3.1 肿瘤的酸性微环境 | 第18-19页 |
| 1.3.2 pHLIP | 第19-20页 |
| 1.4 本课题的研究内容与意义 | 第20-23页 |
| 第二章 TpB的制备 | 第23-38页 |
| 2.1 实验试剂 | 第23页 |
| 2.2 主要试剂配制方法 | 第23-24页 |
| 2.3 实验仪器 | 第24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.4.1 pET-32a-pHLIP-Beclin1重组质粒构建 | 第24-29页 |
| 2.4.2 TpB蛋白异源表达 | 第29页 |
| 2.4.3 TpB蛋白纯化 | 第29-30页 |
| 2.4.4 Trx标签蛋白异源表达 | 第30页 |
| 2.4.5 Trx标签蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.4.6 Beclin1保守区域氨基酸序列合成 | 第31页 |
| 2.4.7 Trx和TpB质谱鉴定 | 第31页 |
| 2.4.8 圆二色谱测定TpB结构 | 第31页 |
| 2.5 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.5.1 pHLIP-Beclin1目的基因成功扩增 | 第31-32页 |
| 2.5.2 pHLIP-Beclin1阳性克隆鉴定并测序验证 | 第32页 |
| 2.5.3 Trx标签蛋白与TpB蛋白异源表达 | 第32-33页 |
| 2.5.4 Trx标签蛋白与TpB蛋白纯化 | 第33-37页 |
| 2.6 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 TpB的体外抗肿瘤活性研究 | 第38-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.2 主要实验设备与仪器 | 第38-39页 |
| 3.3 主要试剂配制方法 | 第39-40页 |
| 3.4 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.4.1 MTT检测细胞活力 | 第40页 |
| 3.4.2 结晶紫染色 | 第40页 |
| 3.4.3 CFDA-SE染色 | 第40-41页 |
| 3.4.4 吖啶橙染色(AO染色) | 第41-42页 |
| 3.4.5 Ad-mCherry-GFP-LC3B慢病毒转染 | 第42页 |
| 3.4.6 电镜观察自噬体(TEM) | 第42-43页 |
| 3.4.7 Western blot检测自噬标记蛋白表达水平 | 第43-44页 |
| 3.5 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.5.1 MTT检测细胞活力 | 第44-45页 |
| 3.5.2 结晶紫染色实验 | 第45-47页 |
| 3.5.3 CFDA-SE标记的增殖试验 | 第47-48页 |
| 3.5.4 AO染色法检测细胞自噬 | 第48-49页 |
| 3.5.5 Ad-mCherry-GFP-LC3B转染实验 | 第49-51页 |
| 3.5.6 透射电镜(TEM)观察自噬泡 | 第51-52页 |
| 3.5.7 Western blot检测自噬 | 第52-53页 |
| 3.6 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 TpB的体内抗肿瘤活性评价 | 第54-62页 |
| 4.1 实验方法 | 第54页 |
| 4.1.1 裸鼠与肿瘤模型建立 | 第54页 |
| 4.1.2 体内抑瘤实验 | 第54页 |
| 4.1.3 TpB在体内的生物分布 | 第54页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第54-61页 |
| 4.2.1 TpB通过激活体内自噬延缓异种移植肿瘤的生长 | 第54-57页 |
| 4.2.2 TpB的体内生物分布 | 第57-59页 |
| 4.2.3 TpB的生物安全性评价 | 第59-61页 |
| 4.3 小结 | 第61-62页 |
| 总结与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简介及联系方式 | 第71-74页 |
