摘要 | 第4-8页 |
Abstract | 第8-12页 |
英文缩略语 | 第13-17页 |
第一部分:HER-2介导激素受体阳性乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的机制研究 | 第17-31页 |
1 前言 | 第17-18页 |
2 材料与方法 | 第18-22页 |
2.1 试剂 | 第18页 |
2.2 仪器 | 第18-19页 |
2.3 实验方法 | 第19-21页 |
2.3.1 细胞培养 | 第19-20页 |
2.3.2 MTT法进行细胞增殖能力检测 | 第20页 |
2.3.3 集落形成法进行细胞增殖能力检测 | 第20页 |
2.3.4 免疫沉降方法检测蛋白质结合 | 第20-21页 |
2.3.5 Western blot检测蛋白水平 | 第21页 |
2.4 统计学分析 | 第21-22页 |
3 实验结果 | 第22-28页 |
3.1 HER-2过表达BT474细胞对他莫昔芬耐药,而HER-2阴性细胞T47D对他莫昔芬敏感 | 第22-24页 |
3.2 HER-2过表达的BT474细胞中存在ER-c-Src-HER-2三聚复合物 | 第24-26页 |
3.3 BT474细胞中,ER-c-Src-HER-2复合物的关键分子HER-2异常活化 | 第26-28页 |
4 讨论 | 第28-30页 |
5 结论 | 第30-31页 |
第二部分:脂筏调控乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的机制研究 | 第31-47页 |
1 前言 | 第31-32页 |
2 材料与方法 | 第32-36页 |
2.1 试剂 | 第32页 |
2.2 仪器 | 第32-33页 |
2.3 实验方法 | 第33-35页 |
2.3.1 细胞培养 | 第33页 |
2.3.2 免疫荧光检测脂筏分布 | 第33页 |
2.3.3 MTT法进行细胞增殖能力检测 | 第33-34页 |
2.3.4 集落形成法进行细胞增殖能力检测 | 第34页 |
2.3.5 免疫沉降方法检测蛋白质结合 | 第34页 |
2.3.6 Western blot检测蛋白水平 | 第34-35页 |
2.3.7 脂质体介导siRNA转染 | 第35页 |
2.4 统计学分析 | 第35-36页 |
3 实验结果 | 第36-44页 |
3.1 在他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞中,抑制脂筏功能干扰ER-c-Src-HER-2三聚复合物的形成 | 第36-37页 |
3.2 在他莫昔芬耐药乳腺癌细胞中,抑制脂筏功能部分抑制增殖信号通路的活化 | 第37-38页 |
3.3 抑制脂筏功能,部分逆转乳腺癌细胞他莫昔芬耐药 | 第38-40页 |
3.4 用siRNA抑制HER-2表达,阻止ER-c-Src-HER-2三聚复合物的形成 | 第40-41页 |
3.5 用siRNA抑制HER-2表达,抑制他莫昔芬耐药乳腺癌细胞中增殖信号的活化 | 第41-42页 |
3.6 用siRNA抑制HER-2表达,部分逆转乳腺癌细胞的他莫昔芬耐药 | 第42-44页 |
4 讨论 | 第44-46页 |
5 结论 | 第46-47页 |
第三部分:Cbl家族蛋白参与HER-2过表达乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的机制研究 | 第47-69页 |
1 前言 | 第47-48页 |
2 材料与方法 | 第48-55页 |
2.1 试剂 | 第48页 |
2.2 仪器 | 第48-49页 |
2.3 实验方法 | 第49-54页 |
2.3.1 细胞培养 | 第49页 |
2.3.2 c-Cbl过表达质粒构建 | 第49-51页 |
2.3.3 c-Cbl过表达质粒的扩增和提取 | 第51页 |
2.3.4 用3×flag CMV9-c-Cbl过表达质粒转染BT474细胞 | 第51-52页 |
2.3.5 Western blot方法检测蛋白表达水平 | 第52页 |
2.3.6 免疫沉降方法检测蛋白质结合 | 第52-53页 |
2.3.7 应用MTT方法检测过表达c-Cbl后的细胞活力 | 第53页 |
2.3.8 集落形成法检测过表达c-Cbl对细胞他莫昔芬敏感性的影响 | 第53页 |
2.3.9 动物实验:利用慢病毒转染建立c-Cbl过表达的乳腺癌细胞皮下移植瘤模型 | 第53-54页 |
2.4 统计学分析 | 第54-55页 |
3 实验结果 | 第55-66页 |
3.1 构建3×flag CMV9-c-Cbl过表达质粒 | 第55-58页 |
3.2 在BT474细胞中,过表达c-Cbl减少ER-c-Src-HER-2复合物形成,逆转他莫昔芬耐药 | 第58-61页 |
3.3 动物实验证实过表达c-Cbl可部分逆转他莫昔芬耐药,增加他莫昔芬的药物敏感性 | 第61-66页 |
4 讨论 | 第66-68页 |
5 结论 | 第68-69页 |
本研究创新性的自我评价 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-75页 |
综述 | 第75-86页 |
参考文献 | 第80-86页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第86-87页 |
致谢 | 第87-88页 |
个人简介 | 第88页 |