| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1. 柑橘溃疡病概况 | 第13-16页 |
| ·柑橘溃疡病的发生历史及分布 | 第13-14页 |
| ·柑橘溃疡病的危害及致病机理 | 第14-15页 |
| ·柑橘溃疡病的病原菌 | 第15-16页 |
| 2. 植物的抗病反应 | 第16-17页 |
| 3. 植物抗病基因的研究 | 第17-22页 |
| ·植物抗病基因的结构及其特点 | 第17-19页 |
| ·核苷酸结合位点(nucleotide binding site,NBS) | 第17-18页 |
| ·富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeats,LRR) | 第18-19页 |
| ·丝氨酸/苏氨酸激酶域(STK) | 第19页 |
| ·亮氨酸拉链(leucine zipper,LZ) | 第19页 |
| ·植物抗病基因的类型与功能 | 第19-22页 |
| 4. 植物抗病基因的克隆 | 第22-24页 |
| ·转座子标签技术(transposon tagging) | 第22页 |
| ·图位克隆技术(map-based cloning) | 第22-23页 |
| ·同源序列技术(homologous sequence) | 第23页 |
| ·发展中的植物基因克隆新技术 | 第23-24页 |
| 5. 植物抗病基因同源序列(resistance gene analogs,RGAs) | 第24-26页 |
| ·RGAs的应用 | 第24-26页 |
| ·以RGAs为探针,定位和克隆抗病基因 | 第25页 |
| ·辅助抗病育种 | 第25页 |
| ·分析评价种质资源的遗传多样性 | 第25-26页 |
| ·问题与展望 | 第26页 |
| 6. 立项的依据和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 柑橘抗溃疡病同源基因的克隆与分析 | 第28-45页 |
| 1. 材料与试剂 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌种及质粒 | 第28页 |
| ·生化试剂 | 第28-29页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第29页 |
| 2. 方法 | 第29-35页 |
| ·柑橘叶片总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·DNA质量检测 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增特意带的回收 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·回收产物的克隆 | 第32页 |
| ·连接 | 第32页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第32页 |
| ·阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·重组子的酶切分类 | 第34页 |
| ·序列分析 | 第34-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-42页 |
| ·柑橘RGA的克隆 | 第35-38页 |
| ·柑橘总DNA的提取 | 第35页 |
| ·目的片段的扩增 | 第35-36页 |
| ·目的片段的回收 | 第36页 |
| ·连接转化与蓝白筛选 | 第36页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·酶切分类 | 第37-38页 |
| ·柑橘抗病基因同源序列分析 | 第38-42页 |
| ·克隆片段的测序结果及初步分析 | 第38-39页 |
| ·柑橘抗病基因同源序列的聚类分析 | 第39-41页 |
| ·柑橘RGAs与已知的植物抗病基因相关氨基酸序列相似性比较 | 第41-42页 |
| 4. 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 柑橘NBS类抗病同源基因的分子鉴定 | 第45-62页 |
| 1. 材料与试剂 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·酶与主要生物试剂 | 第45页 |
| ·杂交试剂盒 | 第45页 |
| ·常用试剂 | 第45-46页 |
| 2. 方法 | 第46-55页 |
| ·NBS类抗病基因的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·引物的设计 | 第46-47页 |
| ·柑橘基因组DNA中RGA的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·Southern印迹杂交 | 第47-52页 |
| ·CTAB法大量提取植物总DNA | 第47-48页 |
| ·样品的酶切与电泳 | 第48-50页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第48页 |
| ·DNA样品的消化 | 第48-49页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第49-50页 |
| ·转膜与DNA的固定 | 第50-52页 |
| ·DNA的变性 | 第50页 |
| ·转膜 | 第50-51页 |
| ·DNA的固定 | 第51-52页 |
| ·探针的标记与探针灵敏度检测 | 第52-54页 |
| ·PCR法快速制备地高辛标记探针 | 第52页 |
| ·标记探针灵敏度的检测 | 第52-54页 |
| ·杂交 | 第54-55页 |
| 3. 结果与分析 | 第55-59页 |
| ·柑橘基因组DNA中RGA的PCR检测 | 第55页 |
| ·植物组织总DNA大量提取 | 第55-56页 |
| ·样品的酶切、电泳 | 第56-57页 |
| ·PCR标记地高辛探针 | 第57页 |
| ·标记探针灵敏度的检测 | 第57-58页 |
| ·Southern印迹杂交检测结果 | 第58-59页 |
| 4. 讨论 | 第59-62页 |
| ·PCR鉴定 | 第59页 |
| ·southern印记杂交 | 第59-61页 |
| ·DNA样品的制备 | 第59页 |
| ·PCR标记DIG探针 | 第59-60页 |
| ·转膜和固定 | 第60页 |
| ·预杂交和杂交 | 第60-61页 |
| ·关于柑橘NBS类抗病基因的拷贝数 | 第61-62页 |
| 第四章 全文总结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录:9个阳性克隆的测序结果 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
