| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词对照表 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.肺癌与肿瘤转移 | 第12-13页 |
| 2.可变剪接与肿瘤 | 第13-16页 |
| 2.1 可变剪接概述 | 第13页 |
| 2.2 可变剪接的方式 | 第13-14页 |
| 2.3 可变剪接的调控与肿瘤的关系 | 第14-16页 |
| 3.Mena与肿瘤转移 | 第16-17页 |
| 4.PTBP1与肿瘤转移 | 第17-18页 |
| 5.课题思路 | 第18-19页 |
| 6.技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 PTBP1对肺癌细胞转移与侵袭能力的影响 | 第20-49页 |
| 1.前言 | 第20页 |
| 2.实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1 细胞和质粒 | 第20-21页 |
| 2.2 主要材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.3 实验常用溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.4 实验仪器 | 第23-24页 |
| 3.实验方法 | 第24-35页 |
| 3.1 细胞培养 | 第24页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第24-26页 |
| 3.3 免疫印迹分析(Western blot) | 第26-28页 |
| 3.4 TGFβ诱导细胞EMT模型 | 第28页 |
| 3.5 PTBP1逆转录病毒过表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 3.6 PTBP1shRNA逆转录病毒敲降载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.7 PTBP1过表达或敲降细胞系的构建 | 第32-33页 |
| 3.8 细胞划痕实验 | 第33-34页 |
| 3.9 Transwell侵袭实验 | 第34-35页 |
| 4.实验结果 | 第35-47页 |
| 4.1 PTBP1在高转移性肺癌细胞中高表达 | 第35-38页 |
| 4.2 TGFβ诱导细胞EMT进程中PTBP1的表达变化 | 第38-41页 |
| 4.3 过表达PTBP1促进肺癌细胞的转移与侵袭 | 第41-45页 |
| 4.4 敲降PTBP1抑制肺癌细胞的转移与侵袭 | 第45-47页 |
| 5.讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 PTBP1调控Mena可变剪接分子机制的研究 | 第49-67页 |
| 1.前言 | 第49-50页 |
| 2.实验材料 | 第50-51页 |
| 2.1 细胞和质粒 | 第50页 |
| 2.2 实验试剂 | 第50页 |
| 2.3 实验常用溶液配制 | 第50-51页 |
| 2.4 实验仪器 | 第51页 |
| 3.实验方法 | 第51-56页 |
| 3.1 反转录PCR(RT-PCR)检测Mena异构体 | 第51-52页 |
| 3.2 Mena的minigene载体构建 | 第52-54页 |
| 3.3 细胞核蛋白的提取 | 第54页 |
| 3.4 RNA-pulldown实验 | 第54-55页 |
| 3.5 Mena minigene突变载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.实验结果 | 第56-64页 |
| 4.1 MenaINV在肺癌细胞以及EMT进程中的比例变化 | 第56-58页 |
| 4.2 过表达或敲降PTBP1对MenaINV比例的影响 | 第58-59页 |
| 4.3 minigene水平上PTBP1对Mena可变剪接的影响 | 第59-62页 |
| 4.4 PTBP1调控Mena可变剪接结合位点的初步确定 | 第62-64页 |
| 5.讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 PTBP1介导的95-D细胞转移与侵袭部分依赖于MenaINV | 第67-80页 |
| 1.前言 | 第67页 |
| 2.实验材料 | 第67-69页 |
| 2.1 细胞和质粒 | 第67页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第67-68页 |
| 2.3 实验常用溶液配制 | 第68-69页 |
| 2.4 实验仪器 | 第69页 |
| 3.实验方法 | 第69-71页 |
| 3.1 Mena逆转录病毒过表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 3.2 Mena和Mena11a shRNA逆转录病毒敲降载体的构建 | 第70页 |
| 3.3 细胞丝状伪足的检测 | 第70-71页 |
| 4.实验结果 | 第71-77页 |
| 4.1 MenaINV过表达载体和Mena、Mena11a敲降载体的构建 | 第71页 |
| 4.2 MenaINV过表达逆转shPTBP1抑制95-D细胞的转移与侵袭 | 第71-72页 |
| 4.3 敲降Mena逆转PTBP1过表达促进95-D细胞的转移与侵袭 | 第72-76页 |
| 4.4 丝状伪足的形成受PTBP1介导的Mena异构体变化调控 | 第76-77页 |
| 5.讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 总结与展望 | 第80-82页 |
| 5.1 全文总结 | 第80页 |
| 5.2 展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 附录 | 第89-96页 |
| 硕士学位期间参与发表的论文 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
