| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语及符号 | 第11-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 研究概述 | 第12-13页 |
| 2 病原学 | 第13页 |
| 3 致病机理 | 第13-14页 |
| 4 猪肺炎支原体疫苗研究进展 | 第14-17页 |
| 4.1 灭活疫苗 | 第15页 |
| 4.2 弱毒疫苗 | 第15-16页 |
| 4.3 基因工程疫苗 | 第16-17页 |
| 5 干粉疫苗研究进展 | 第17-21页 |
| 5.1 干粉疫苗免疫机制 | 第17-18页 |
| 5.2 干粉疫苗优势 | 第18-19页 |
| 5.3 影响干粉疫苗效果的主要因素 | 第19-21页 |
| 5.4 人用干粉疫苗发展现状 | 第21页 |
| 6 猪SC和sIgA研究进展 | 第21-24页 |
| 6.1 黏膜免疫系统 | 第22页 |
| 6.2 sIgA和SC的结构 | 第22-23页 |
| 6.3 sIgA和SC的功能 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-30页 |
| 第二篇 研究内容 | 第30-80页 |
| 第一章 猪肺炎支原体168株干粉疫苗制备 | 第30-48页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 菌株 | 第30页 |
| 1.2 主要材料与试剂 | 第30页 |
| 1.3 试验仪器 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| 2.1 Mhp 168菌株复苏 | 第31页 |
| 2.2 Mhp 168菌株活力检测 | 第31页 |
| 2.3 Mhp 168菌株扩大培养与冻存 | 第31页 |
| 2.4 Mhp 168菌株耐热性检测 | 第31-32页 |
| 2.5 基础赋形剂筛选 | 第32页 |
| 2.6 喷雾干燥优化 | 第32-34页 |
| 2.7 干粉特性评价 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| 3.1 Mhp 168菌株耐热性检测 | 第34-35页 |
| 3.2 基础赋形剂筛选 | 第35页 |
| 3.3 喷雾干燥优化 | 第35-36页 |
| 3.4 干粉特性评价 | 第36-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 第二章 猪分泌片原核表达及单克隆抗体制备 | 第48-72页 |
| 1 材料 | 第48-49页 |
| 1.1 质粒、菌株和细胞 | 第48页 |
| 1.2 主要材料与试剂 | 第48-49页 |
| 1.3 试验仪器 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-60页 |
| 2.1 猪pIgR跨膜区及信号肽分析 | 第49页 |
| 2.2 引物设计与合成 | 第49页 |
| 2.3 猪气管上皮细胞中全RNA提取 | 第49-50页 |
| 2.4 猪SC蛋白基因片段扩增 | 第50-51页 |
| 2.5 SC蛋白基因回收 | 第51-52页 |
| 2.6 猪SC蛋白基因与载体pMD18-T连接 | 第52页 |
| 2.7 连接产物转化 | 第52页 |
| 2.8 重组质粒提取、PCR及测序 | 第52-53页 |
| 2.9 原核表达载体pCold I/SC构建 | 第53-54页 |
| 2.10 重组质粒提取、PCR及鉴定 | 第54-55页 |
| 2.11 SC重组蛋白诱导表达及检测 | 第55页 |
| 2.12 SC重组蛋白诱导条件优化及存在形式分析 | 第55-56页 |
| 2.13 SC重组蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 2.14 SC重组蛋白鉴定 | 第57页 |
| 2.15 小鼠免疫 | 第57页 |
| 2.16 SP 2/0细胞准备 | 第57页 |
| 2.17 细胞融合 | 第57-58页 |
| 2.18 猪SC杂交瘤细胞株建立 | 第58-59页 |
| 2.19 单抗腹水制备 | 第59-60页 |
| 2.20 单抗特性鉴定 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-66页 |
| 3.1 猪pIgR跨膜区及信号肽分析 | 第60-61页 |
| 3.2 猪SC基因扩增 | 第61-62页 |
| 3.3 pMD18-T/SC和pCold I/SC重组质粒构建与鉴定 | 第62页 |
| 3.4 猪SC蛋白诱导表达及存在形式分析 | 第62-63页 |
| 3.5 猪SC重组蛋白纯化及鉴定 | 第63-64页 |
| 3.6 小鼠免疫后血清效价检测 | 第64-65页 |
| 3.7 杂交瘤细胞株建立 | 第65页 |
| 3.8 猪SC蛋白单抗特性鉴定 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第三章 猪sIgA单克隆抗体制备 | 第72-80页 |
| 1 材料 | 第72-73页 |
| 1.1 细胞 | 第72页 |
| 1.2 主要材料与试剂 | 第72页 |
| 1.3 试验仪器 | 第72-73页 |
| 2 方法 | 第73-74页 |
| 2.1 小鼠免疫 | 第73页 |
| 2.2 SP 2/0细胞准备 | 第73页 |
| 2.3 细胞融合 | 第73页 |
| 2.4 猪sIgA杂交瘤细胞株建立 | 第73页 |
| 2.5 单抗腹水制备 | 第73页 |
| 2.6 单抗特性鉴定 | 第73-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-76页 |
| 3.1 小鼠免疫后血清效价检测 | 第74页 |
| 3.2 杂交瘤细胞株建立 | 第74页 |
| 3.3 猪sIgA蛋白单抗特异性鉴定 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| 全文总结 | 第80-82页 |
| 附录 | 第82-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 发表论文 | 第88页 |