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3C蛋白在EV71诱导的细胞凋亡中的作用机制及Caspase-3抑制剂的保护作用

前言第4-6页
中文摘要第6-8页
Abstarct第8-10页
缩略词表第11-15页
第1章 绪论第15-22页
    1.1 研究背景第15-16页
    1.2 EV71病毒结构特点和非结构蛋白 3C研究进展第16-18页
    1.3 CASPASE激活调控宿主细胞凋亡的机制探究第18-21页
        1.3.1 EV71感染宿主细胞的凋亡研究状况第18-19页
        1.3.2 宿主细胞凋亡与病毒复制的关系第19-21页
    1.4 抗EV71药物研究进展第21-22页
第2章 材料和方法第22-32页
    2.1 实验材料,仪器和试剂第22-24页
        2.1.1 病毒和细胞第22页
        2.1.2 质粒和突变体的构建第22页
        2.1.3 主要仪器第22-23页
        2.1.4 抗体第23页
        2.1.5 主要试剂第23-24页
    2.2 实验方法第24-32页
        2.2.1 细胞复苏、培养及传代第24页
        2.2.2 病毒扩增第24页
        2.2.3 实验分组第24-25页
        2.2.4 使用Caspase抑制剂时处理过程第25页
        2.2.5 细胞形态学及核染色第25-26页
        2.2.6 lipo2000转染法细胞转染实验第26页
        2.2.7 凝胶电泳和免疫印迹第26页
        2.2.8 半胱天冬酶活性测定第26-27页
        2.2.9 免疫共沉淀第27页
        2.2.10 琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段化第27-28页
        2.2.11 MTT法测定细胞增殖率第28页
        2.2.12 使用血细胞计数器进行细胞计数第28页
        2.2.13 IL-6分泌的酶联免疫吸附测定(ELISA)第28-29页
        2.2.14 通过流式细胞法进行细胞周期分析第29页
        2.2.15 5'UTR质粒构建和萤光素酶测定第29-30页
        2.2.16 定量实时RT PCR第30-31页
        2.2.17 蔗糖垫超速离心法收获病毒第31页
        2.2.18 病毒滴度测定第31页
        2.2.19 统计分析第31-32页
第3章 结果与分析第32-49页
    3.1 3C能够引起细胞凋亡,结合并激活CASPASE-8、9 进而激活CASPASE-3第32-36页
        3.1.1 EV71感染和非结构蛋白 3C引起细胞的病变效应第32-33页
        3.1.2 EV71的非结构 3C蛋白酶结合Caspase-8 和Caspase-9 并介导caspase-3 的激活第33-36页
    3.2 CASPASE-3 抑制剂抑制 3C转染HEPG2细胞中的CASPASE-3 活化和并阻止细胞病变第36-38页
        3.2.1 Caspase-3 抑制剂抑制 3C转染的细胞中的Caspase-3 活化第36-37页
        3.2.2 Caspase-3 抑制剂抑制 3C转染的细胞病变效应第37-38页
    3.3 CASPASE-3 抑制剂保护RD细胞免于EV71感染诱导的细胞病变效应第38-44页
        3.3.1 Caspase-3 抑制剂浓度最佳选择第38-39页
        3.3.2 Caspase-3 抑制剂抑制EV71感染细胞中的Caspase-3 活化第39-41页
        3.3.3 Caspase-3 抑制剂避免EV71感染RD细胞病变效应的出现第41-43页
        3.3.4 Caspase-3 抑制剂抑制RD细胞炎症因子释放第43页
        3.3.5 Caspase-3 抑制剂反转EV71感染RD细胞引起的S期阻滞第43-44页
    3.4 CASPASE-3 抑制剂抑制EV71感染性第44-49页
        3.4.1 Caspase-3 抑制剂对病毒侵入和复制的影响第44-46页
        3.4.2 Caspase-3 抑制剂对病毒蛋白VP1表达和病毒毒力的影响第46-49页
第4章 讨论第49-54页
    4.1 CASPASE-3,8,9 与 3C之间的相互作用关系第49-51页
    4.2 CASPASE-3 抑制剂通过抑制 3C活化CASPASE-3 阻止细胞病变第51页
    4.3 CASPASE-3 抑制剂阻止宿主细胞的凋亡的发生第51-52页
    4.4 CASPASE-3 抑制剂对EV71病毒感染性和毒力的影响第52-54页
第5章 结论与创新点第54-55页
参考文献第55-63页
作者简介及硕士期间取得的成果第63-64页
致谢第64页

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