前言 | 第4-6页 |
中文摘要 | 第6-8页 |
Abstarct | 第8-10页 |
缩略词表 | 第11-15页 |
第1章 绪论 | 第15-22页 |
1.1 研究背景 | 第15-16页 |
1.2 EV71病毒结构特点和非结构蛋白 3C研究进展 | 第16-18页 |
1.3 CASPASE激活调控宿主细胞凋亡的机制探究 | 第18-21页 |
1.3.1 EV71感染宿主细胞的凋亡研究状况 | 第18-19页 |
1.3.2 宿主细胞凋亡与病毒复制的关系 | 第19-21页 |
1.4 抗EV71药物研究进展 | 第21-22页 |
第2章 材料和方法 | 第22-32页 |
2.1 实验材料,仪器和试剂 | 第22-24页 |
2.1.1 病毒和细胞 | 第22页 |
2.1.2 质粒和突变体的构建 | 第22页 |
2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
2.1.4 抗体 | 第23页 |
2.1.5 主要试剂 | 第23-24页 |
2.2 实验方法 | 第24-32页 |
2.2.1 细胞复苏、培养及传代 | 第24页 |
2.2.2 病毒扩增 | 第24页 |
2.2.3 实验分组 | 第24-25页 |
2.2.4 使用Caspase抑制剂时处理过程 | 第25页 |
2.2.5 细胞形态学及核染色 | 第25-26页 |
2.2.6 lipo2000转染法细胞转染实验 | 第26页 |
2.2.7 凝胶电泳和免疫印迹 | 第26页 |
2.2.8 半胱天冬酶活性测定 | 第26-27页 |
2.2.9 免疫共沉淀 | 第27页 |
2.2.10 琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段化 | 第27-28页 |
2.2.11 MTT法测定细胞增殖率 | 第28页 |
2.2.12 使用血细胞计数器进行细胞计数 | 第28页 |
2.2.13 IL-6分泌的酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第28-29页 |
2.2.14 通过流式细胞法进行细胞周期分析 | 第29页 |
2.2.15 5'UTR质粒构建和萤光素酶测定 | 第29-30页 |
2.2.16 定量实时RT PCR | 第30-31页 |
2.2.17 蔗糖垫超速离心法收获病毒 | 第31页 |
2.2.18 病毒滴度测定 | 第31页 |
2.2.19 统计分析 | 第31-32页 |
第3章 结果与分析 | 第32-49页 |
3.1 3C能够引起细胞凋亡,结合并激活CASPASE-8、9 进而激活CASPASE-3 | 第32-36页 |
3.1.1 EV71感染和非结构蛋白 3C引起细胞的病变效应 | 第32-33页 |
3.1.2 EV71的非结构 3C蛋白酶结合Caspase-8 和Caspase-9 并介导caspase-3 的激活 | 第33-36页 |
3.2 CASPASE-3 抑制剂抑制 3C转染HEPG2细胞中的CASPASE-3 活化和并阻止细胞病变 | 第36-38页 |
3.2.1 Caspase-3 抑制剂抑制 3C转染的细胞中的Caspase-3 活化 | 第36-37页 |
3.2.2 Caspase-3 抑制剂抑制 3C转染的细胞病变效应 | 第37-38页 |
3.3 CASPASE-3 抑制剂保护RD细胞免于EV71感染诱导的细胞病变效应 | 第38-44页 |
3.3.1 Caspase-3 抑制剂浓度最佳选择 | 第38-39页 |
3.3.2 Caspase-3 抑制剂抑制EV71感染细胞中的Caspase-3 活化 | 第39-41页 |
3.3.3 Caspase-3 抑制剂避免EV71感染RD细胞病变效应的出现 | 第41-43页 |
3.3.4 Caspase-3 抑制剂抑制RD细胞炎症因子释放 | 第43页 |
3.3.5 Caspase-3 抑制剂反转EV71感染RD细胞引起的S期阻滞 | 第43-44页 |
3.4 CASPASE-3 抑制剂抑制EV71感染性 | 第44-49页 |
3.4.1 Caspase-3 抑制剂对病毒侵入和复制的影响 | 第44-46页 |
3.4.2 Caspase-3 抑制剂对病毒蛋白VP1表达和病毒毒力的影响 | 第46-49页 |
第4章 讨论 | 第49-54页 |
4.1 CASPASE-3,8,9 与 3C之间的相互作用关系 | 第49-51页 |
4.2 CASPASE-3 抑制剂通过抑制 3C活化CASPASE-3 阻止细胞病变 | 第51页 |
4.3 CASPASE-3 抑制剂阻止宿主细胞的凋亡的发生 | 第51-52页 |
4.4 CASPASE-3 抑制剂对EV71病毒感染性和毒力的影响 | 第52-54页 |
第5章 结论与创新点 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-63页 |
作者简介及硕士期间取得的成果 | 第63-64页 |
致谢 | 第64页 |