| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 淀粉酶概述 | 第8-9页 |
| 1.2 4-α-糖基转移酶(EC 2.4.1.25) | 第9-12页 |
| 1.2.1 4-α-糖基转移酶简介 | 第9页 |
| 1.2.2 4-α-糖基转移酶的催化机理 | 第9页 |
| 1.2.3 4-α-糖基转移酶的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2.4 4-α-糖基转移酶的应用 | 第10-12页 |
| 1.2.4.1 4-α-糖基转移酶在改良淀粉性质上应用 | 第10-11页 |
| 1.2.4.2 4-α-糖基转移酶在生产大环糊精上的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.4.3 4-α-糖基转移酶的转糖基作用的应用 | 第12页 |
| 1.3 嗜热菌概述 | 第12-14页 |
| 1.3.1 嗜热菌 | 第12-13页 |
| 1.3.2 嗜热菌的优点 | 第13页 |
| 1.3.3 嗜热栖热菌T.thermophilus HB8,T.thermophilus HB27 | 第13-14页 |
| 1.4 热激表达载体pHsh简介 | 第14-15页 |
| 1.5 立题背景及本文研究内容 | 第15-17页 |
| 1.5.1 立题背景 | 第15-16页 |
| 1.5.2 本文研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 4-α-糖基转移酶的克隆、表达及性质研究 | 第17-34页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 培养基 | 第17页 |
| 2.1.3 主要化学试剂及酶 | 第17-19页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.5 DNA引物合成和DNA测序服务 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 T. thermophilus HB8基因组的提取及检测 | 第19-20页 |
| 2.2.2 分子生物学基本操作 | 第20-22页 |
| 2.2.3 4-a-glucanotransferase的基因克隆及表达 | 第22-24页 |
| 2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24页 |
| 2.2.5 蛋白质浓度的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.6 优化4-a-glucanotransferase基因表达载体pHsh-4aGTas-Y的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.7 4-a-glucanotransferase的纯化方法 | 第27-28页 |
| 2.2.8 4-a-glucanotransferase催化产物的薄层色谱(TLC)分析 | 第28页 |
| 2.2.8.1 薄层板制备 | 第28页 |
| 2.2.8.2 点样 | 第28页 |
| 2.2.8.3 展层 | 第28页 |
| 2.2.8.4 显色 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 目的片段4aGTase克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.2 表达质粒pHsh-4aGTas的构建 | 第29页 |
| 2.3.3 4-a-glucanotransferase在E. coli DH10B中的表达 | 第29-30页 |
| 2.3.4 优化质粒pHsh-4aGTas-Y的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.5 优化质粒pHsh-4aGTas-Y与pHsh-4aGTas表达量的比较 | 第31页 |
| 2.3.6 4-a-glucanotransferase的纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.7 4-a-glucanctransferase催化产物的TLC分析 | 第32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 α-葡萄糖苷酶的克隆、表达及性质研究 | 第34-47页 |
| 3.1 综述 | 第34-37页 |
| 3.1.1 α-葡萄糖苷酶概述 | 第34页 |
| 3.1.2 α-葡萄糖苷酶的来源 | 第34页 |
| 3.1.3 α-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第34-35页 |
| 3.1.4 α-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第35-36页 |
| 3.1.5 α-葡萄糖苷酶的生物学功能 | 第36页 |
| 3.1.6 α-葡萄糖苷酶的工业应用 | 第36页 |
| 3.1.7 嗜热菌的α-葡萄糖苷酶 | 第36-37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第37页 |
| 3.2.2 培养基和培养基的配制 | 第37页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第37页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.3 方法 | 第37-41页 |
| 3.3.1 电转化感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 3.3.2 嗜热栖热菌T.thermophilus HB27基因组的提取及检测 | 第37页 |
| 3.3.3 基因操作 | 第37-38页 |
| 3.3.4 目的片段PCR扩增及表达质粒pHsh-agla的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.5 质粒pHsh-agla在E coli DH1OB中热激表达 | 第39页 |
| 3.3.6 重组蛋白pHsh-agla的纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.7 重组蛋白酶学性质分析 | 第40-41页 |
| 3.3.7.1 原理 | 第40页 |
| 3.3.7.2 pNPG标准曲线 | 第40页 |
| 3.3.7.3 Agla最适pH的测定 | 第40页 |
| 3.3.7.4 Agla最适反应温度的测定 | 第40-41页 |
| 3.3.7.5 Agla pH稳定性的测定 | 第41页 |
| 3.3.7.6 Agla温度稳定性的测定 | 第41页 |
| 3.3.7.7 金属离子对Agla酶学活性的影响 | 第41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-46页 |
| 3.4.1 α-葡萄糖苷酶基因agla的扩增 | 第41-42页 |
| 3.4.2 表达质粒pHsh-agla的构建 | 第42页 |
| 3.4.3 质粒pHsh-agla在E. coli DH10B中热激表达结果 | 第42-43页 |
| 3.4.4 pHsh-agla的纯化结果 | 第43-44页 |
| 3.4.5 Agla的酶学性质分析 | 第44-46页 |
| 3.4.5.1 Agla最适反应pH的测定 | 第44页 |
| 3.4.5.2 Agla最适反应温度的测定 | 第44-45页 |
| 3.4.5.3 Agla pH稳定性的测定 | 第45页 |
| 3.4.5.4 Agla温度稳定性的测定 | 第45页 |
| 3.4.5.5 金属离子对Agla酶学活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 全文总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
