| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 中英文缩略词表 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-27页 |
| 1.1 肺的结构 | 第10-13页 |
| 1.1.1 气管的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 肺泡的基本结构 | 第12-13页 |
| 1.2 肺的发育过程 | 第13-16页 |
| 1.2.1 分支发育 | 第13-14页 |
| 1.2.2 肺泡发育 | 第14-16页 |
| 1.3 肺泡发育的调控机制 | 第16-20页 |
| 1.3.1 糖皮质激素 | 第16-17页 |
| 1.3.2 视黄酸 | 第17-18页 |
| 1.3.3 成纤维细胞生长因子10 | 第18页 |
| 1.3.4 甲状旁腺激素相关蛋白 | 第18页 |
| 1.3.5 白血病抑制因子/胰岛素样生长因子 | 第18-19页 |
| 1.3.6 组蛋白去乙酰化酶3 | 第19-20页 |
| 1.4 机械力在肺发育过程中的作用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 机械力在肺分支发育中的作用 | 第20-21页 |
| 1.4.2 机械力在肺泡发育中的作用 | 第21-22页 |
| 1.5 活体实时动态成像技术(Live Imaging) | 第22-25页 |
| 1.5.1 活体实时动态成像技术的优势和原理 | 第22-23页 |
| 1.5.2 活体实时动态成像技术在皮肤研究中的运用 | 第23-24页 |
| 1.5.3 活体实时动态成像技术在腹腔器官中的运用 | 第24页 |
| 1.5.4 活体实时动态成像技术在成鼠肺中的运用 | 第24-25页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.1.1 野生型小鼠 | 第27页 |
| 2.1.2 转基因小鼠 | 第27页 |
| 2.2 常规试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.1 PCR相关试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 RNA提取相关试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 反转录与real-time PCR相关试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 免疫组织化学实验相关试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.5 小鼠实验相关试剂 | 第28页 |
| 2.2.6 其它相关试剂 | 第28页 |
| 2.3 实验抗体 | 第28页 |
| 2.3.1 实验所用一抗 | 第28页 |
| 2.3.2 实验所用二抗 | 第28页 |
| 2.4 相关试剂配制 | 第28-29页 |
| 2.4.1 PBS缓冲液 | 第28页 |
| 2.4.2 4%多聚甲醛 | 第28-29页 |
| 2.4.3 DAPI染液 | 第29页 |
| 2.4.4 他莫昔芬(20mg/ml) | 第29页 |
| 2.4.5 封闭液的配制 | 第29页 |
| 2.4.6 麻醉剂的配制 | 第29页 |
| 2.5 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.5.1 显微镜 | 第29页 |
| 2.5.2 组织学相关仪器 | 第29页 |
| 2.5.3 流式细胞分选仪器 | 第29页 |
| 2.5.4 分子生物学仪器 | 第29-30页 |
| 2.6 分析软件 | 第30页 |
| 2.7 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.7.1 谱系追踪实验 | 第30页 |
| 2.7.2 建立体外小鼠肺双光子实验系统 | 第30-31页 |
| 2.7.3 建立活体胚胎小鼠双光子实验系统 | 第31页 |
| 2.7.4 抽羊水实验 | 第31-32页 |
| 2.7.5 往羊水中注射荧光小球实验 | 第32页 |
| 2.7.6 原代肺泡祖细胞及间质细胞的分离 | 第32-33页 |
| 2.7.7 细胞迁移实验 | 第33页 |
| 2.7.8 牵拉肺泡祖细胞 | 第33页 |
| 2.7.9 软硬胶上培养肺泡祖细胞 | 第33页 |
| 2.7.10 免疫荧光染色 | 第33-34页 |
| 2.7.11 Wholemount染色 | 第34页 |
| 2.7.12 FGF10 in situ | 第34-36页 |
| 2.7.13 RNA提取 | 第36页 |
| 2.7.14 反转录 | 第36页 |
| 2.7.15 real-time PCR | 第36-37页 |
| 2.7.16 图像的拍摄及处理 | 第37页 |
| 2.7.17 小鼠基因型鉴定 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第38-69页 |
| 3.1 肺泡祖细胞的分化由机械力调控 | 第38-43页 |
| 3.1.1 羊水减少模型的建立及结果分析 | 第38-40页 |
| 3.1.2 肺泡祖细胞的标记和分选 | 第40-41页 |
| 3.1.3 体外培养确认肺泡祖细胞分化是受机械力大小调控 | 第41-43页 |
| 3.2 建立活体实时动态成像系统 | 第43-46页 |
| 3.2.1 活体实时动态成像系统的建立 | 第43-45页 |
| 3.2.2 建立体外实时动态成像系统 | 第45-46页 |
| 3.3 部分肺泡祖细胞能够向上皮细胞基底侧迁移 | 第46-49页 |
| 3.3.1 部分肺泡祖细胞向上皮细胞基底侧迁移 | 第46-47页 |
| 3.3.2 活体实时动态成像系统确认肺泡袓细胞向上皮细胞基底侧迁移是真实的细朐行为 | 第47-48页 |
| 3.3.3 肺泡祖细胞伪足是由肌动蛋白(actin)组成的动态结构 | 第48-49页 |
| 3.4 肺泡祖细胞向上皮细胞基底侧迁移行为受FGF10介导的ERK1/2信号通路调控 | 第49-53页 |
| 3.4.1 FGF10在肺泡间质细胞中大量表达 | 第50页 |
| 3.4.2 FGF10在体外肺培养系统中调控肺泡祖细胞向上皮细胞基底侧伸出伪足的行为 | 第50-52页 |
| 3.4.3 Transwell实验验证FGF10在调控肺泡祖细胞迁移中的作用 | 第52-53页 |
| 3.5 向基底侧迁移的肺泡袓细胞分化成肺泡二型细胞而不向基底侧迁移的肺泡袓细胞分化成肺泡一型细胞 | 第53-57页 |
| 3.5.1 向基底侧迁移的肺泡祖细胞在迁移之后维持了祖细胞状态 | 第53-54页 |
| 3.5.2 建立人工模拟胚胎肺呼吸运动模型 | 第54-56页 |
| 3.5.3 向基底侧迁移的肺泡祖细胞分化成肺泡二型细胞而不向基底侧迁移的肺泡祖细胞分化成肺泡一型细胞 | 第56-57页 |
| 3.5.4 模拟胚胎呼吸运动后肺泡上皮细胞之间仍紧密相连 | 第57页 |
| 3.6 肺泡祖细胞向上皮细胞基底侧迁移行为确保肺泡祖细胞分化成肺泡二型细胞 | 第57-64页 |
| 3.6.1 抑制肺泡祖细胞向上皮细胞基底侧迁移行为则抑制了肺泡祖细胞向肺泡二型细胞的分化 | 第58-59页 |
| 3.6.2 抑制FGF10信号通路则抑制肺泡祖细胞向肺泡二型细胞分化 | 第59-60页 |
| 3.6.3 敲除FGFR2抑制肺泡祖细胞分化成肺泡二型细胞 | 第60-61页 |
| 3.6.4 抑制FGF10下游信号通路ERK1/2则抑制肺泡祖细胞向肺泡二型细胞分化 | 第61-62页 |
| 3.6.5 抑制FGF10信号通路以及抽取羊水并不影响肺的气管发育 | 第62-63页 |
| 3.6.6 在肺泡祖细胞向上皮细胞基底侧迁移之前模拟胚胎呼吸运动导致几乎所有肺泡祖细胞分化成肺泡一型细胞 | 第63-64页 |
| 3.7 向基底侧迁移的肺泡祖细胞在其顶端富集大量的肌球蛋白 | 第64-69页 |
| 3.7.1 在向上皮细胞基底侧迁移过程中肺泡祖细胞顶端面积逐渐减小 | 第64-66页 |
| 3.7.2 向上皮细胞基底侧迁移的肺泡祖细胞顶端富集大量的肌球蛋白 | 第66-67页 |
| 3.7.3 肌球蛋白抑制剂Blebbistatin促使向上皮细胞基底侧迁移后的肺泡祖细胞分化成肺泡一型细胞 | 第67-69页 |
| 第四章 讨论 | 第69-72页 |
| 4.1 机械力对肺泡祖细胞分化过程中的命运抉择具有决定性的作用 | 第69页 |
| 4.2 肺泡发育过程 | 第69-70页 |
| 4.3 肌球蛋白在肺泡发育中的作用 | 第70-72页 |
| 第五章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 实验用抗体列表 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
