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猪丁型冠状病毒HB-BD株分离鉴定及生物学特性研究

摘要第4-6页
abstract第6-7页
缩写词表第8-11页
1 引言第11-19页
    1.1 猪丁型冠状病毒概述第11页
    1.2 PDCoV的生物学特性第11-14页
        1.2.1 PDCoV的分类地位第11页
        1.2.2 形态特征第11-12页
        1.2.3 培养特性第12页
        1.2.4 PDCoV基因组结构第12-13页
        1.2.5 结构蛋白第13页
        1.2.6 PDCoV流行病学第13-14页
        1.2.7 PDCoV的致病性第14页
    1.3 PDCoV诊断方法第14-17页
        1.3.1 病原学检测方法第15-16页
        1.3.2 血清学诊断方法第16-17页
    1.4 疫苗与防控技术第17页
    1.5 RNA干扰技术的研究进展第17-18页
        1.5.1 RNAi的作用机制第17页
        1.5.2 RNAi的特点第17页
        1.5.3 RNAi的抗病毒机制第17-18页
        1.5.4 RNAi在猪病毒感染的应用第18页
    1.6 研究的目的及意义第18-19页
2 材料与方法第19-39页
    2.1 材料第19-22页
        2.1.1 病料第19页
        2.1.2 细胞和菌株第19页
        2.1.3 血清第19页
        2.1.4 主要试剂、试剂盒与耗材第19-20页
        2.1.5 主要溶液的配置第20-21页
        2.1.6 主要仪器第21-22页
    2.2 方法第22-39页
        2.2.1 PDCoVHB-BD株的分离与鉴定第22-25页
        2.2.2 PDCoVHB-BD株全基因序列分析第25-28页
        2.2.3 重组表达质粒的构建及鉴定第28-30页
        2.2.4 重组表达质粒pET-32a-S1的诱导表达及重组蛋白的鉴定第30-31页
        2.2.5 血清中PDCoVIgG抗体间接ELISA检测方法的建立第31-33页
        2.2.6 小干扰RNA对PDCoV在ST细胞内复制的影响第33-39页
3 结果第39-61页
    3.1 临床样本的检测结果第39页
    3.2 病毒分离鉴定第39-41页
        3.2.1 细胞病变鉴定第39-40页
        3.2.2 RT-PCR鉴定第40页
        3.2.3 IFA鉴定第40-41页
        3.2.4 TCID_50测定结果第41页
    3.3 PDCoVHB-BD株全基因序列及进化树分析第41-44页
        3.3.1 PDCoVHB-BD株全基因组的RT-PCR扩增第41-42页
        3.3.2 PDCoVHB-BD株的基因结构特点第42页
        3.3.3 PDCoVHB-BD株全基因序列分析第42-43页
        3.3.4 全基因进化树分析第43-44页
    3.4 PDCoVS1蛋白间接ELISA方法的建立第44-56页
        3.4.1 PDCoV-S1基因的扩增及鉴定第44-45页
        3.4.2 重组表达质粒pET-32a-S1的构建及鉴定第45-46页
        3.4.3 pET-32a-S1的原核表达及重组蛋白的鉴定第46-48页
        3.4.4 ELISA检测方法条件的确定及优化第48-56页
    3.5 小干扰RNA对PDCoV在ST细胞内复制的影响第56-61页
        3.5.1 pGenesil-shRNA质粒的PCR鉴定第56页
        3.5.2 细胞转染结果第56-57页
        3.5.3 RNAi对细胞产生病变的影响第57-58页
        3.5.4 病毒感染滴度测定结果第58页
        3.5.5 荧光定量PCR对RNA干扰效果的检测结果第58-61页
4 讨论第61-65页
    4.1 病毒的分离鉴定第61页
    4.2 HB-BD分离株的全基因序列分析第61-62页
    4.3 PDCoVS1基因优势抗原表位区的克隆及原核表达第62页
    4.4 间接ELISA检测方法的建立第62-63页
    4.5 质粒表达的siRNA对PDCoV在ST细胞内复制的抑制效应第63-65页
5 结论第65-66页
参考文献第66-74页
在读期间发表的学术论文第74-75页
作者简介第75-76页
致谢第76-77页
详细摘要第77-78页

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