| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 缩写词表 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 猪丁型冠状病毒概述 | 第11页 |
| 1.2 PDCoV的生物学特性 | 第11-14页 |
| 1.2.1 PDCoV的分类地位 | 第11页 |
| 1.2.2 形态特征 | 第11-12页 |
| 1.2.3 培养特性 | 第12页 |
| 1.2.4 PDCoV基因组结构 | 第12-13页 |
| 1.2.5 结构蛋白 | 第13页 |
| 1.2.6 PDCoV流行病学 | 第13-14页 |
| 1.2.7 PDCoV的致病性 | 第14页 |
| 1.3 PDCoV诊断方法 | 第14-17页 |
| 1.3.1 病原学检测方法 | 第15-16页 |
| 1.3.2 血清学诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.4 疫苗与防控技术 | 第17页 |
| 1.5 RNA干扰技术的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5.1 RNAi的作用机制 | 第17页 |
| 1.5.2 RNAi的特点 | 第17页 |
| 1.5.3 RNAi的抗病毒机制 | 第17-18页 |
| 1.5.4 RNAi在猪病毒感染的应用 | 第18页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-39页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 病料 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞和菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 血清 | 第19页 |
| 2.1.4 主要试剂、试剂盒与耗材 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要溶液的配置 | 第20-21页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-39页 |
| 2.2.1 PDCoVHB-BD株的分离与鉴定 | 第22-25页 |
| 2.2.2 PDCoVHB-BD株全基因序列分析 | 第25-28页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.4 重组表达质粒pET-32a-S1的诱导表达及重组蛋白的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 血清中PDCoVIgG抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第31-33页 |
| 2.2.6 小干扰RNA对PDCoV在ST细胞内复制的影响 | 第33-39页 |
| 3 结果 | 第39-61页 |
| 3.1 临床样本的检测结果 | 第39页 |
| 3.2 病毒分离鉴定 | 第39-41页 |
| 3.2.1 细胞病变鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 RT-PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.2.3 IFA鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.4 TCID_50测定结果 | 第41页 |
| 3.3 PDCoVHB-BD株全基因序列及进化树分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 PDCoVHB-BD株全基因组的RT-PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.3.2 PDCoVHB-BD株的基因结构特点 | 第42页 |
| 3.3.3 PDCoVHB-BD株全基因序列分析 | 第42-43页 |
| 3.3.4 全基因进化树分析 | 第43-44页 |
| 3.4 PDCoVS1蛋白间接ELISA方法的建立 | 第44-56页 |
| 3.4.1 PDCoV-S1基因的扩增及鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.2 重组表达质粒pET-32a-S1的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4.3 pET-32a-S1的原核表达及重组蛋白的鉴定 | 第46-48页 |
| 3.4.4 ELISA检测方法条件的确定及优化 | 第48-56页 |
| 3.5 小干扰RNA对PDCoV在ST细胞内复制的影响 | 第56-61页 |
| 3.5.1 pGenesil-shRNA质粒的PCR鉴定 | 第56页 |
| 3.5.2 细胞转染结果 | 第56-57页 |
| 3.5.3 RNAi对细胞产生病变的影响 | 第57-58页 |
| 3.5.4 病毒感染滴度测定结果 | 第58页 |
| 3.5.5 荧光定量PCR对RNA干扰效果的检测结果 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 病毒的分离鉴定 | 第61页 |
| 4.2 HB-BD分离株的全基因序列分析 | 第61-62页 |
| 4.3 PDCoVS1基因优势抗原表位区的克隆及原核表达 | 第62页 |
| 4.4 间接ELISA检测方法的建立 | 第62-63页 |
| 4.5 质粒表达的siRNA对PDCoV在ST细胞内复制的抑制效应 | 第63-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 详细摘要 | 第77-78页 |
