| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1.1 昆虫感器概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 感器的形态结构与感受机制 | 第15-16页 |
| 1.1.2 感器的类型及功能 | 第16-17页 |
| 1.2 昆虫气味结合蛋白研究进展 | 第17-25页 |
| 1.2.1 气味结合蛋白分类 | 第18-20页 |
| 1.2.2 气味结合蛋白分子特征 | 第20页 |
| 1.2.3 气味结合蛋白结构 | 第20-21页 |
| 1.2.4 气味结合蛋白合成与释放机制 | 第21-23页 |
| 1.2.5 气味结合蛋白生理功能 | 第23-24页 |
| 1.2.6 气味结合蛋白表达特点 | 第24-25页 |
| 1.2.7 OBPs 的配体结合能力 | 第25页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第25-27页 |
| 1.4 本研究的技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 梨小食心虫幼虫触角和口器感器的类型与分布研究 | 第28-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第28页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第28页 |
| 2.1.3 数据处理 | 第28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.2.1 触角 | 第29-30页 |
| 2.2.2 上唇 | 第30-31页 |
| 2.2.3 上颚 | 第31页 |
| 2.2.4 舌 | 第31-32页 |
| 2.2.5 下颚 | 第32-33页 |
| 2.2.6 下唇 | 第33-34页 |
| 2.3 讨论 | 第34-37页 |
| 第三章 梨小食心虫成虫喙和下唇须感器的类型与分布研究 | 第37-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37页 |
| 3.1.1 试验供虫 | 第37页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第37页 |
| 3.1.3 数据处理 | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.2.1 上唇 | 第38页 |
| 3.2.2 上颚 | 第38页 |
| 3.2.3 下颚须 | 第38页 |
| 3.2.4 喙 | 第38-41页 |
| 3.2.5 下唇须 | 第41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-45页 |
| 第四章 梨小食心虫性信息素结合蛋白基因的克隆与表达研究 | 第45-69页 |
| 4.1 试验材料 | 第45页 |
| 4.1.1 供试昆虫饲养 | 第45页 |
| 4.1.2 试验样品收集 | 第45页 |
| 4.2 试验方法 | 第45-53页 |
| 4.2.1 总 RNA 和总 DNA 提取 | 第45-46页 |
| 4.2.2 总 RNA 质量检测 | 第46页 |
| 4.2.3 第一链 cDNA 合成 | 第46-47页 |
| 4.2.4 引物设计 | 第47-48页 |
| 4.2.5 PBP 基因片段 PCR 扩增 | 第48-49页 |
| 4.2.6 利用 RACE 扩增 PBP 基因 3′和 5′端序列 | 第49页 |
| 4.2.7 全长 PBP 基因 PCR 验证 | 第49-50页 |
| 4.2.8 外显子和内含子位置确定 | 第50页 |
| 4.2.9 PCR 产物纯化、克隆及测序 | 第50-52页 |
| 4.2.10 序列分析 | 第52页 |
| 4.2.11 PBP 基因组织特异性表达 | 第52页 |
| 4.2.12 交配行为对 PBP 基因表达的影响 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-68页 |
| 4.3.1 成虫触角总 RNA 的提取 | 第53-54页 |
| 4.3.2 PBP 基因片段的克隆 | 第54-56页 |
| 4.3.3 PBP 基因全长 cDNA 的克隆 | 第56-57页 |
| 4.3.4 PBP 基因序列分析 | 第57-63页 |
| 4.3.5 梨小食心虫 PBP 基因的内含子与外显子分析 | 第63页 |
| 4.3.6 PBP 基因组织特异性表达 | 第63-64页 |
| 4.3.7 实时定量 PCR 产物熔解曲线分析 | 第64-65页 |
| 4.3.8 内参基因与目的基因 PCR 扩增效率分析 | 第65-66页 |
| 4.3.9 两个 PBP 基因相对表达量的比较 | 第66-67页 |
| 4.3.10 交配行为对梨小食心虫 PBP 基因表达的影响 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-69页 |
| 第五章 梨小食心虫性信息素结合蛋白基因的原核表达、蛋白纯化及结合特性分析 | 第69-84页 |
| 5.1 试验材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 供试昆虫饲养 | 第69页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第69-70页 |
| 5.2 试验方法 | 第70-75页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第70页 |
| 5.2.2 PCR 扩增 | 第70-71页 |
| 5.2.3 表达载体构建 | 第71页 |
| 5.2.4 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第71-72页 |
| 5.2.5 重组蛋白的可溶性检测及蛋白变性 | 第72页 |
| 5.2.6 蛋白纯化 | 第72页 |
| 5.2.7 表达产物 SDS-PAGE 检测 | 第72-73页 |
| 5.2.8 抗体制备及检测 | 第73页 |
| 5.2.9 Western 印迹检测 | 第73-74页 |
| 5.2.10 荧光结合实验 | 第74页 |
| 5.2.11 触角电位反应（EAG） | 第74-75页 |
| 5.3 结果与分析 | 第75-83页 |
| 5.3.1 目的基因 PCR 扩增 | 第75页 |
| 5.3.2 重组表达载体的构建 | 第75-76页 |
| 5.3.3 蛋白诱导表达、纯化及 Westen 检测 | 第76-78页 |
| 5.3.4 PBP 结合特性分析 | 第78-81页 |
| 5.3.5 EAG 反应分析 | 第81-83页 |
| 5.4 讨论 | 第83-84页 |
| 第六章 气味结合蛋白基因 OBP3 的克隆、表达及结合特性分析 | 第84-103页 |
| 6.1 试验材料 | 第84-85页 |
| 6.1.1 试虫饲养 | 第84页 |
| 6.1.2 试验样品收集 | 第84-85页 |
| 6.2 试验方法 | 第85-88页 |
| 6.2.1 梨小食心虫总 RNA 提取 | 第85页 |
| 6.2.2 第一链 cDNA 合成 | 第85页 |
| 6.2.3 引物设计 | 第85-86页 |
| 6.2.4 OBP3 片段的获得 | 第86页 |
| 6.2.5 利用 RACE 技术扩增 OBP3 的 3′和 5′端序列 | 第86页 |
| 6.2.6 OBP3 全长基因的 PCR 验证 | 第86-87页 |
| 6.2.7 序列分析 | 第87页 |
| 6.2.8 OBP3 组织特异性分析 | 第87页 |
| 6.2.9 OBP3 在不同时期的表达情况分析 | 第87-88页 |
| 6.2.10 OBP3 的原核表达 | 第88页 |
| 6.2.11 蛋白纯化 | 第88页 |
| 6.2.12 OBP3 结合特性分析 | 第88页 |
| 6.3 结果与分析 | 第88-100页 |
| 6.3.1 OBP3 cDNA 片段的克隆 | 第88-90页 |
| 6.3.2 OBP3 全长 cDNA 序列的克隆 | 第90-91页 |
| 6.3.3 OBP3 序列分析 | 第91-95页 |
| 6.3.4 OBP3 的组织特异性表达 | 第95页 |
| 6.3.5 实时定量 PCR 产物的熔解曲线分析 | 第95-96页 |
| 6.3.6 内参基因与目的基因 PCR 扩增效率分析 | 第96页 |
| 6.3.7 OBP3 在不同时期的表达情况 | 第96-97页 |
| 6.3.8 OBP3 的原核表达 | 第97-98页 |
| 6.3.9 OBP3 结合特性分析 | 第98-100页 |
| 6.4 讨论 | 第100-103页 |
| 第七章 全文总结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 个人简介 | 第120页 |
