| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 水仙病毒病研究概况 | 第12-13页 |
| 1.2 水仙病毒检测技术 | 第13-19页 |
| 1.3 侵染水仙的主要病毒研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus,NMV) | 第19页 |
| 1.3.2 水仙黄条病毒(Narcissus yellow stripe virus,NYSV) | 第19-20页 |
| 1.3.3 水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus,NLV) | 第20-21页 |
| 1.3.4 水仙迟黄病毒(Narcissus late season yellows virus,NLSYV) | 第21页 |
| 1.3.5 水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus, NDV) | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 仪器 | 第23页 |
| 2.2 研究方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 水仙病毒病的田间调查 | 第23-24页 |
| 2.2.2 感染病毒的水仙叶片总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.3 引物的设计与筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.4 两步法单重RT-PCR扩增5种病原 | 第25-27页 |
| 2.2.4.1 反转录合成cDNA | 第26页 |
| 2.2.4.2 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5 特异性和灵敏度检测 | 第27页 |
| 2.2.6 三重RT-PCR体系的摸索和优化 | 第27页 |
| 2.2.7 三重PCR体系的建立 | 第27-28页 |
| 2.2.8 基因克隆与序列测定 | 第28-31页 |
| 2.2.8.1 PCR产物纯化回收 | 第28页 |
| 2.2.8.2 PCR产物与载体的连接 | 第28-29页 |
| 2.2.8.3 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.8.4 转化和筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.8.5 质粒DNA的小量制备 | 第30-31页 |
| 2.2.8.6 重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.8.7 PCR产物的序列测定与分析 | 第31页 |
| 2.2.9 三重PCR扩增产物的克隆及重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.10 三重PCR扩增产物的序列测定 | 第31页 |
| 2.2.11 三重RT-PCR体系的灵敏度测定 | 第31页 |
| 2.2.12 三重RT-PCR优化体系检测田间样品 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-55页 |
| 3.1 田间调查结果分析 | 第33页 |
| 3.2 RT-PCR检测结果 | 第33-34页 |
| 3.3 特异性和灵敏性检测 | 第34-36页 |
| 3.4 PCR扩增产物的克隆及重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.5 序列测定与分析 | 第37页 |
| 3.6 三种病毒的常规RT-PCR检测技术建立 | 第37-38页 |
| 3.7 三重PCR检测结果及优化 | 第38-42页 |
| 3.7.1 三重RT-PCR反应体系的优化 | 第38-40页 |
| 3.7.1.1 cDNA模板用量的影响 | 第39页 |
| 3.7.1.2 引物浓度的影响 | 第39页 |
| 3.7.1.3 Mg~(2+)浓度的影响 | 第39页 |
| 3.7.1.4 Taq DNA聚合酶的影响 | 第39-40页 |
| 3.7.2 多重RT-PCR反应循环条件的优化 | 第40-42页 |
| 3.7.2.1 退火温度的影响 | 第40-41页 |
| 3.7.2.2 循环数的影响 | 第41-42页 |
| 3.8 三重RT-PCR优化体系的建立 | 第42-43页 |
| 3.9 三重RT-PCR扩增产物的克隆及重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.10 序列测定与分析 | 第44页 |
| 3.11 检测灵敏度测定 | 第44-45页 |
| 3.12 田间样品的检测 | 第45-46页 |
| 3.13 基因片段的克隆与序列分析 | 第46-55页 |
| 3.13.1 平潭水仙6 CP基因片段的序列分析与比较 | 第46-49页 |
| 3.13.2 平潭水仙Y9 Nia-Pro基因片段的序列分析与比较 | 第49-52页 |
| 3.13.3 漳州水仙X1 CP基因片段的序列分析与比较 | 第52-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 关于水仙病毒调查与检测 | 第55页 |
| 4.2 常规RT-PCR检测 | 第55-56页 |
| 4.3 关于三重RT-PCR反应 | 第56页 |
| 4.4 检测技术展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 缩写词和英汉对照 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
