| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第9-21页 |
| 1.1 DKK1 研究概况 | 第9-11页 |
| 1.1.1 DKK1 是经典信号通路的拮抗剂 | 第9-10页 |
| 1.1.2 DKK1 的生物学功能概述 | 第10-11页 |
| 1.2 本文研究项目目的及拟解决关键问题 | 第11-12页 |
| 1.2.1 研究目标 | 第11-12页 |
| 1.2.2 关键难点 | 第12页 |
| 1.3 基因组转录调控元件分析鉴定方法研究进展 | 第12-21页 |
| 1.3.1 转录调控元件筛选方法 | 第13-15页 |
| 1.3.2 用于转录调控元件分析定位的表观修饰标志物概述 | 第15-18页 |
| 1.3.3 候选转录调控元件的功能验证方法 | 第18-19页 |
| 1.3.4 小结 | 第19-21页 |
| 第2章 DKK1 启动子片段重组质粒构建 | 第21-35页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2.2 试剂配制方法 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.3.1 肺癌细胞基因组提取： | 第22-23页 |
| 2.3.2 DKK1 近端启动子序列引物设计 | 第23页 |
| 2.3.3. PCR 扩增目的片段 | 第23-25页 |
| 2.3.4 DKK1 启动子载体构建及酶切验证 | 第25-30页 |
| 2.4 实验结果分析 | 第30-33页 |
| 2.4.1 A549 基因组提取 | 第30-31页 |
| 2.4.2 DKK1 近端启动子片段 PCR 扩增 | 第31-32页 |
| 2.4.3 DKK1 近端启动子重组质粒双酶切验证 | 第32页 |
| 2.4.4 重组质粒测序 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-35页 |
| 第3章 DKK1 启动子片段表达活性检测 | 第35-47页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 实验仪器、材料及试剂 | 第35-38页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.2 试剂与材料 | 第36-37页 |
| 3.2.3 试剂配制 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 质粒中提 | 第38-39页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第39-42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-44页 |
| 3.4.1 DKK1 启动子片段在 A549 和 H460 中的表达活性 | 第42-43页 |
| 3.4.2 DKK1 启动子片段 H446 和 Eca109 细胞中的表达活性 | 第43-44页 |
| 3.4.3 DKK1 启动子片段在 HEK293 和 changliver 细胞中的表达活性 | 第44页 |
| 3.5 小结 | 第44-47页 |
| 第4章 DKK1 增强子调控元件预测分析 | 第47-55页 |
| 4.1 前言 | 第47-48页 |
| 4.2 DNase I 超敏感位点分析 | 第48-49页 |
| 4.3 组蛋白修饰分析 | 第49-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 第5章 DKK1 基因候选调控元件的功能验证 | 第55-69页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第55-61页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.2.2 试剂配制方法 | 第55页 |
| 5.2.3 实验方法 | 第55-61页 |
| 5.3 实验结果分析 | 第61-67页 |
| 5.3.1 候选 TRE 元件 PCR 结果 | 第61-62页 |
| 5.3.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第62页 |
| 5.3.3 重组质粒测序 | 第62页 |
| 5.3.4 候选 TRE 元件生物活性验证 | 第62-67页 |
| 5.4 小结 | 第67-69页 |
| 第6章 结论 | 第69-71页 |
| 6.1 结果与讨论 | 第69-70页 |
| 6.2 不足之处 | 第70页 |
| 6.3 本研究创新点 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 在学期间发表的研究论文及成果 | 第81-83页 |
| 附录1 | 第83-85页 |
| 附录2 | 第85-87页 |
