| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 异种移植研究 | 第13-22页 |
| 1.1.1 器官移植概况 | 第13-16页 |
| 1.1.2 免疫排斥种类 | 第16-18页 |
| 1.1.3 CMAH、β4GalNT2基因简介 | 第18-20页 |
| 1.1.4 异种移植常用小型猪种类 | 第20页 |
| 1.1.5 异种器官移植研究进展 | 第20-21页 |
| 1.1.6 中国异种移植研究前沿 | 第21-22页 |
| 1.2 基因编辑技术 | 第22-27页 |
| 1.2.1 基因编辑技术的发展 | 第22-23页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas系统的分类及结构 | 第23-24页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9系统作用机制及发展 | 第24-26页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9技术的广泛应用 | 第26页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9存在问题及展望 | 第26-27页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 CMAH基因敲除巴马猪的制备及繁育评估 | 第28-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-32页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.2 设计构建CRISPR/Cas9打靶载体 | 第29页 |
| 2.1.3 sgRNA活性检测 | 第29-30页 |
| 2.1.4 细胞转染筛选及单克隆鉴定 | 第30页 |
| 2.1.5 CMAH基因敲除克隆猪的制备及鉴定 | 第30页 |
| 2.1.6 脱靶分析 | 第30-31页 |
| 2.1.7 免疫荧光检测 | 第31页 |
| 2.1.8 血常规和血生化检测 | 第31页 |
| 2.1.9 窝产子数统计 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.2.1 sgRNA打靶载体的构建及基因突变效率检测 | 第32页 |
| 2.2.2 单克隆鉴定突变类型 | 第32-33页 |
| 2.2.3 基因敲除猪的制备及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.4 脱靶分析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 免疫荧光检测 | 第35-36页 |
| 2.2.6 CMAH~(-/-)猪血液检测 | 第36-37页 |
| 2.2.7 CMAH~(-/-)猪生产力统计 | 第37-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-39页 |
| 2.4 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 Β4GALNT2基因敲除巴马猪的制备 | 第40-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-42页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.2 设计构建CRISPR/Cas9打靶载体 | 第41页 |
| 3.1.3 sgRNA活性检测 | 第41页 |
| 3.1.4 细胞转染筛选及单克隆鉴定 | 第41页 |
| 3.1.5 β4GalNT2基因敲除克隆猪的制备及鉴定 | 第41页 |
| 3.1.6 脱靶分析 | 第41-42页 |
| 3.1.7 DBA检测 | 第42页 |
| 3.2 结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.2.1 sgRNA打靶载体的构建及基因突变效率检测 | 第42-43页 |
| 3.2.2 单克隆鉴定突变类型 | 第43-44页 |
| 3.2.3 基因敲除猪的制备及鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.4 脱靶分析 | 第46-47页 |
| 3.2.5 DBA检测 | 第47-48页 |
| 3.3 讨论 | 第48-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 急性免疫反应检测 | 第50-55页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.2 血液采集 | 第51页 |
| 4.1.3 PBMC分离 | 第51页 |
| 4.1.4 IgG/IgM抗原抗体反应 | 第51-52页 |
| 4.2 结果与分析 | 第52-53页 |
| 4.3 讨论 | 第53-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 结论及主要创新点 | 第55-56页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.2 创新点 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 缩略词 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
