| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| ·群体感应 | 第12-16页 |
| ·群体感应现象的发现 | 第12页 |
| ·群体感应的类型 | 第12-14页 |
| ·革兰氏阴性菌的群体感应 | 第12-14页 |
| ·革兰氏阳性菌的群体感应 | 第14页 |
| ·种间群体感应 | 第14页 |
| ·信号分子及其检测 | 第14-15页 |
| ·信号分子的检测原理 | 第14页 |
| ·微生物传感菌(或质粒)的种类 | 第14-15页 |
| ·信号分子的检测方法 | 第15页 |
| ·群体感应的抑制 | 第15-16页 |
| ·抑制信号分子的合成 | 第15-16页 |
| ·降解信号分子 | 第16页 |
| ·抑制信号分子与调节蛋白的结合 | 第16页 |
| ·群体感应淬灭酶AiiA | 第16-20页 |
| ·AiiA酶 | 第16-19页 |
| ·AiiA酶的作用机制和特性 | 第17-18页 |
| ·AiiA酶的生物学功能 | 第18页 |
| ·AiiA酶在生防及药理学上的应用 | 第18-19页 |
| ·AiiA酶的存在 | 第19-20页 |
| ·原核生物中的AiiA酶 | 第19页 |
| ·真核生物中的AiiA酶 | 第19-20页 |
| ·DNA改组 | 第20-23页 |
| ·体外分子进化的新策略 | 第20-22页 |
| ·DNA家族改组 | 第20-21页 |
| ·单链DNA家族改组 | 第21页 |
| ·部分基因片段改组 | 第21页 |
| ·简并引物基因改组 | 第21-22页 |
| ·基因组改组 | 第22页 |
| ·其他分子进化方法 | 第22页 |
| ·体外分子进化展望 | 第22-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-44页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·药品与试剂 | 第24-25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-44页 |
| ·aiiA基因库的构建 | 第26-36页 |
| ·aiiA基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·基因组的抽提 | 第26页 |
| ·aiiA基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·aiiA基因的割胶回收 | 第27页 |
| ·DNA Shuffling | 第27-31页 |
| ·aiiA基因的DNase Ⅰ(Rnase Free)酶切 | 第27-28页 |
| ·DNase Ⅰ(Rnase Free)使用浓度的优化 | 第28页 |
| ·DNase Ⅰ(Rnase Free)酶切时间的优化 | 第28页 |
| ·DNase Ⅰ(Rnase Free)酶切产物割胶回收 | 第28页 |
| ·aiiAshuffling基因的无引物PCR | 第28-30页 |
| ·第一轮无引物PCR | 第29页 |
| ·第二轮无引物PCR | 第29页 |
| ·第三轮无引物PCR | 第29-30页 |
| ·aiiAshuffling基因的有引物PCR | 第30-31页 |
| ·aiiAshuffling基因的PCR产物割胶回收 | 第31页 |
| ·aiiAshuffling/pET-28a(+)/BL21(DE3)的构建 | 第31-36页 |
| ·pET-28a(+)质粒的抽提 | 第31-32页 |
| ·aiiAshuffling基因和pET-28a(+)质粒的酶切、连接 | 第32-33页 |
| ·BL21(DE3)感受态的制备 | 第33页 |
| ·aiiAshuffling/pET-28a(+)的转化 | 第33-34页 |
| ·AiiA蛋白诱导表达 | 第34-36页 |
| ·高酶活AiiA蛋白的筛选 | 第36-43页 |
| ·报告菌CV026的培养 | 第36-37页 |
| ·3OC6-HSL信号分子的制备 | 第37-40页 |
| ·luxI/pET-28a(+)/BL21(DE3)的构建 | 第37-39页 |
| ·luxI基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·luxI和pET-28a(+)的酶切、连接 | 第38-39页 |
| ·luxI/pET-28a(+)的转化 | 第39页 |
| ·3OC6-HSL信号分子的制备 | 第39-40页 |
| ·筛选体系的建立 | 第40页 |
| ·筛选体系的优化 | 第40页 |
| ·产3OC6-HSL信号分子培养物体积的优化 | 第40页 |
| ·CV026报告菌体积的优化 | 第40页 |
| ·酶反应时间的优化 | 第40页 |
| ·高酶活AiiA蛋白的初筛 | 第40页 |
| ·筛选结果测序 | 第40-41页 |
| ·进化前后AiiA蛋白的氨基酸差异 | 第41页 |
| ·高酶活AiiA蛋白的制备 | 第41-43页 |
| ·AiiA蛋白的表达 | 第41页 |
| ·AiiA蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·AiiA蛋白的复性 | 第42-43页 |
| ·AiiA蛋白的浓缩 | 第43页 |
| ·AiiA蛋白的酶活性分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第43页 |
| ·AiiA蛋白活性分析 | 第43-44页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第44-65页 |
| ·aiiA基因库的构建 | 第44-52页 |
| ·aiiA基因的扩增 | 第44-45页 |
| ·基因组的抽提 | 第44页 |
| ·aiiA基因的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·aiiA基因的割胶回收 | 第45页 |
| ·DNA Shuffling | 第45-50页 |
| ·aiiA基因的DNase Ⅰ(RNase Free)酶切 | 第45-47页 |
| ·DNase Ⅰ(RNase Free)使用浓度的优化 | 第45-46页 |
| ·DNase Ⅰ(RNase Free)酶切时间的优化 | 第46-47页 |
| ·DNase Ⅰ(RNase Free)酶切产物割胶回收 | 第47-48页 |
| ·aiiAshuffling基因的无引物PCR | 第48-49页 |
| ·第一轮无引物PCR | 第48页 |
| ·第二轮无引物PCR | 第48-49页 |
| ·第三轮无引物PCR | 第49页 |
| ·aiiAshuffling基因的有引物PCR | 第49-50页 |
| ·aiiAshuffling基因的PCR产物割胶回收 | 第50页 |
| ·aiiAshuffling/pET-28a(+)/BL21(DE3)的构建 | 第50-52页 |
| ·pET-28a(+)质粒的抽提 | 第50-51页 |
| ·aiiAshuffling基因和pET-28a(+)质粒的酶切、连接 | 第51页 |
| ·BL21(DE3)感受态的制备 | 第51页 |
| ·aiiAshuffling/pET-28a(+)的转化 | 第51页 |
| ·AiiA蛋白诱导表达 | 第51-52页 |
| ·高酶活AiiA蛋白的筛选 | 第52-62页 |
| ·报告菌CV026的培养 | 第52页 |
| ·3OC6-HSL信号分子的制备 | 第52-53页 |
| ·luxI/pET-28a(+)/BL21(DE3)的构建 | 第52-53页 |
| ·luxI基因的PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·luxI和pET-28a(+)的酶切、连接 | 第53页 |
| ·luxI/pET-28a(+)的转化 | 第53页 |
| ·3OC6-HSL信号分子的制备 | 第53页 |
| ·培养基的选择 | 第53页 |
| ·诱导温度的优化 | 第53页 |
| ·诱导时间的优化 | 第53页 |
| ·筛选体系的建立 | 第53页 |
| ·筛选体系的优化 | 第53-54页 |
| ·产3OC6-HSL信号分子培养物体积的优化 | 第53-54页 |
| ·CV026报告菌体积的优化 | 第54页 |
| ·酶反应时间的优化 | 第54页 |
| ·高酶活AiiA蛋白的初筛 | 第54-55页 |
| ·筛选结果测序 | 第55-58页 |
| ·进化前后AiiA蛋白的氨基酸差异 | 第58-61页 |
| ·高酶活AiiA蛋白的制备 | 第61-62页 |
| ·AiiA蛋白的表达 | 第61页 |
| ·AiiA蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| ·AiiA蛋白的复性 | 第62页 |
| ·AiiA蛋白的浓缩 | 第62页 |
| ·AiiA蛋白的酶活分析 | 第62-65页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第62-63页 |
| ·AiiA蛋白活性分析 | 第63-65页 |
| 第4章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
