| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第15-22页 |
| 1.1 水貂阿留申病概述 | 第15页 |
| 1.2 水貂阿留申病毒的分子生物学研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 ADV的基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 ADV基因的复制和表达 | 第16页 |
| 1.2.3 ADV蛋白的功能 | 第16-17页 |
| 1.3 水貂阿留申病诊断方法的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 病原学诊断 | 第17页 |
| 1.3.2 血清学诊断 | 第17-19页 |
| 1.3.3 分子生物学诊断 | 第19页 |
| 1.4 水貂阿留申病的防制 | 第19-20页 |
| 1.4.1 饲养管理 | 第19-20页 |
| 1.4.2 严格遵守养殖场兽医卫生制度 | 第20页 |
| 1.4.3 建立定期检疫淘汰制度 | 第20页 |
| 1.4.4 建立完善的引种检疫工作 | 第20页 |
| 1.4.5 培育抗病貂的新品种 | 第20页 |
| 1.5 昆虫杆状病毒表达系统 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 中国主要水貂养殖地区水貂阿留申病分子流行病学调查 | 第22-32页 |
| 2.1 简介 | 第22-23页 |
| 2.2 材料和方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验材料及仪器设备 | 第23页 |
| 2.2.2 样品的采集和处理 | 第23页 |
| 2.2.3 AD抗体检测和AMDV基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 VP2基因的扩增及测序 | 第24页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-30页 |
| 2.3.1 AMDV抗体的检测 | 第24-26页 |
| 2.3.2 序列分析 | 第26-28页 |
| 2.3.3 系统分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 水貂阿留申病毒结构基因VP2的表达及纯化 | 第32-44页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 3.1.1 病毒和阳性血清 | 第32页 |
| 3.1.2 菌株、载体、细胞、试剂及仪器 | 第32页 |
| 3.1.3 细胞培养 | 第32页 |
| 3.1.4 引物设计与合成 | 第32-33页 |
| 3.1.5 AMDV-G毒株基因组的获取及VP2基因的扩增 | 第33页 |
| 3.1.6 重组转移载体pFastBacl-VP2的构建 | 第33页 |
| 3.1.7 重组转移载体pFastBacl-VP2的转座及阳性克隆的筛选 | 第33-34页 |
| 3.1.8 重组杆粒Bacmid-VP2的提取和鉴定 | 第34页 |
| 3.1.9 转染sf9昆虫细胞 | 第34页 |
| 3.1.10 重组杆状病毒的收获 | 第34页 |
| 3.1.11 VP2蛋白的表达及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.12 VP2蛋白的纯化及鉴定 | 第35页 |
| 3.1.13 病毒样粒子的检测 | 第35页 |
| 3.2 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.2.1 AMDV-G株VP2基因的扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.2 重组克隆载体T-VP2的酶切鉴定 | 第36页 |
| 3.2.3 重组转移载体pFastBacl-VP2的酶切鉴定 | 第36页 |
| 3.2.4 重组杆粒的Bacmid-VP2的PCR鉴定 | 第36页 |
| 3.2.5 P3代病毒液感染细胞的病变 | 第36页 |
| 3.2.6 免疫荧光检测 | 第36页 |
| 3.2.7 重组蛋白的Western-b1ot检测 | 第36-40页 |
| 3.2.8 重组蛋白与商业抗原的CIEP对比试验 | 第40-41页 |
| 3.2.9 纯化后重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第41页 |
| 3.2.10 重组蛋白的电镜下观察 | 第41-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-43页 |
| 3.4 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 水貂阿留申病间接ELISA检测方法的建立 | 第44-54页 |
| 4.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.1 试验试剂及材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试验仪器 | 第44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 蛋白含量的测定 | 第44页 |
| 4.2.2 确定间接ELISA各种参数的具体操作方法(方阵滴定法) | 第44-45页 |
| 4.2.3 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第45页 |
| 4.2.4 抗原最佳包被条件的确定 | 第45页 |
| 4.2.5 最佳封闭液的选择 | 第45页 |
| 4.2.6 最佳血清稀释液的选择 | 第45页 |
| 4.2.7 最佳血清反应条件的选择 | 第45-46页 |
| 4.2.8 酶标二抗最佳工作浓度的选择 | 第46页 |
| 4.2.9 酶标二抗最佳反应时间的选择 | 第46页 |
| 4.2.10 底物最佳作用时间的选择 | 第46页 |
| 4.2.11 临界值的判定 | 第46页 |
| 4.2.12 特异性检验 | 第46页 |
| 4.2.13 敏感性检验 | 第46页 |
| 4.2.14 重复性试验 | 第46-47页 |
| 4.2.15 AMDV-VP2-ELISA与CIEP的符合性试验 | 第47页 |
| 4.3 结果 | 第47-52页 |
| 4.3.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度 | 第47页 |
| 4.3.2 抗原最佳包被条件 | 第47页 |
| 4.3.3 最佳封闭液选择 | 第47-48页 |
| 4.3.4 最佳血清稀释液 | 第48页 |
| 4.3.5 最佳血清反应条件 | 第48-49页 |
| 4.3.6 酶标二抗最佳工作浓度 | 第49页 |
| 4.3.7 酶标二抗最佳反应时间 | 第49-50页 |
| 4.3.8 底物最佳作用时间 | 第50页 |
| 4.3.9 临界值的确定 | 第50页 |
| 4.3.10 特异性检验 | 第50-51页 |
| 4.3.11 敏感性检验 | 第51页 |
| 4.3.12 重复性试验 | 第51-52页 |
| 4.3.13 AMDV-VP2-ELISA与CIEP的符合性试验 | 第52页 |
| 4.4 讨论 | 第52页 |
| 4.5 小结 | 第52-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 | 第59-63页 |
| 附录1 实验所用仪器汇总 | 第59-60页 |
| 附录2 含HIs纯化标签的VP2基因序列测序结果 | 第60-61页 |
| 附录3 实验所需溶液配方 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
