| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第11-19页 |
| 1.1 布鲁氏菌病概述 | 第11-13页 |
| 1.2 布鲁氏菌病诊断技术研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 病原学诊断 | 第13页 |
| 1.2.2 血清学诊断技术 | 第13-15页 |
| 1.2.3 荧光偏振技术(FPA) | 第15页 |
| 1.2.4 分子生物学技术 | 第15-16页 |
| 1.3 单克隆抗体原理与应用 | 第16-17页 |
| 1.4 细菌EF-Tu蛋白研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2.材料与方法 | 第19-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验动物、载体和菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-42页 |
| 2.2.1 EF-Tu的克隆构建与原核表达 | 第21-27页 |
| 2.2.2 EF-Tu重组蛋白的表达和纯化 | 第27-32页 |
| 2.2.3 EF-Tu蛋白单克隆抗体的制备 | 第32-35页 |
| 2.2.4 单克隆抗体鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.5 EF-Tu蛋白抗原表位的筛选与鉴定 | 第37-40页 |
| 2.2.6 表位蛋白的初步应用 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| 3.1 EF-Tu基因的克隆 | 第42-46页 |
| 3.1.1 布鲁氏菌tufA基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 3.1.2 质粒转化top10后菌落PCR结果 | 第42-43页 |
| 3.1.3 重组质粒酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.1.4 GST融合蛋白载体酶切检测 | 第44-45页 |
| 3.1.5 GST-FE-Tu蛋白的诱导表达与纯化 | 第45-46页 |
| 3.1.6 布鲁氏菌EF-tu蛋白的原核表达及纯化 | 第46页 |
| 3.2 抗马耳他型布鲁氏菌EF-TuMAb的制备 | 第46-47页 |
| 3.2.1 免疫实验动物 | 第46-47页 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞的筛选 | 第47页 |
| 3.2.3 MAb效价及亚型测定 | 第47页 |
| 3.3 抗B. melitensis EF-TuMAb的鉴定 | 第47-51页 |
| 3.3.1 Western-blot鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.2 间接荧光免疫鉴定 | 第48-51页 |
| 3.4 EF-Tu抗原表位筛选与鉴定 | 第51-55页 |
| 3.4.1 EF-Tu抗原表位筛选 | 第51-53页 |
| 3.4.2 抗原表位中心序列的确认 | 第53-54页 |
| 3.4.3 表位的空间位置和抗原指数 | 第54-55页 |
| 3.5 Dot-blot进行临床牛血清的检测 | 第55-56页 |
| 4.讨论 | 第56-60页 |
| 5.结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
