| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 热带念珠菌 | 第12页 |
| 1.1.1 热带念珠菌危害 | 第12页 |
| 1.2 抗菌肽 | 第12-15页 |
| 1.2.1 抗菌肽的特性 | 第13页 |
| 1.2.2 抗菌肽的合成方法 | 第13-14页 |
| 1.2.3 生物活性肽的分离纯化与鉴定 | 第14-15页 |
| 1.3 CGA-N12研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 人嗜铬粒蛋白A | 第15页 |
| 1.3.2 抗真菌肽CGA-N12简介 | 第15-16页 |
| 1.3.3 CGA-N12的结构和作用机制 | 第16页 |
| 1.4 KRE9简介 | 第16-18页 |
| 1.4.1 KRE9的结构 | 第16-18页 |
| 1.4.2 KRE9的功能 | 第18页 |
| 1.5 蛋白质-蛋白质相互作用(PPI) | 第18-21页 |
| 1.5.1 ITC技术简介 | 第19-20页 |
| 1.5.2 FRET技术简介 | 第20-21页 |
| 1.6 研究内容 | 第21页 |
| 1.7 研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 热带念珠菌KRE9基因的重组表达纯化及ITC检测 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂与酶 | 第23页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 重组质粒pET-28a-KRE9的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.2 pET28a质粒的提取 | 第26页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.4 凝胶电泳实验 | 第27页 |
| 2.2.5 目的基因和载体的双酶切与连接 | 第27-28页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.7 大肠杆菌转化 | 第28页 |
| 2.2.8 大肠杆菌阳性克隆的鉴定 | 第28页 |
| 2.2.9 工程菌E.coliBL21(DE3)(pET28a-KRE9)的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.10 融合蛋白KRE9的诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.11 融合蛋白KRE9的纯化 | 第29页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE检测融合蛋白KRE9的表达及纯化 | 第29页 |
| 2.2.13 融合蛋白KRE9的WesternBlot分析 | 第29-30页 |
| 2.2.14 β-1,6-葡聚糖合成酶制备 | 第30页 |
| 2.2.15 融合蛋白KRE9活性测定 | 第30-31页 |
| 2.2.16 抗菌肽CGA-N12的固相合成 | 第31页 |
| 2.2.17 等温滴定量热法(ITC) | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-38页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆 | 第32页 |
| 2.3.2 转化子测序 | 第32-34页 |
| 2.3.3 融合蛋白KRE9表达与纯化的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 2.3.4 WesternBlot分析 | 第35-36页 |
| 2.3.5 融合蛋白KRE9活性测定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 抗菌肽CGA-N12与KRE9蛋白相互作用力 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 FRET系统的建立 | 第40-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 主要实验仪器和试剂 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-47页 |
| 3.2.1 YFP-CGA-N12和CFP-KRE9的克隆 | 第40-43页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第43-46页 |
| 3.2.3 重组质粒转化和鉴定 | 第46页 |
| 3.2.4 重组质粒的表达纯化及WesternBlot分析 | 第46页 |
| 3.2.5 FRET检测 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-55页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第47页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 转化子测序 | 第48-51页 |
| 3.3.4 融合蛋白的纯化与分析 | 第51-52页 |
| 3.3.5 重组蛋白的WesternBlot分析 | 第52-53页 |
| 3.3.6 CGA-N12与KRE9能量共振转移 | 第53-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 个人简历 | 第69页 |
