| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 脱落的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 脱落的部位——离区 | 第12-13页 |
| 1.1.2 脱落发生的原因 | 第13页 |
| 1.1.3 植物激素与脱落的关系 | 第13-14页 |
| 1.1.4 生长素的运输与运输载体 | 第14-15页 |
| 1.1.5 生长素的运输模式 | 第15页 |
| 1.1.6 生长素极性运输载体PIN | 第15-17页 |
| 1.1.7 PIN介导的极性运输 | 第17页 |
| 1.2 病毒诱导的基因沉默(VIGS) | 第17-20页 |
| 1.2.1 病毒诱导的基因沉默(VIGS)的分子机制 | 第18页 |
| 1.2.2 VIGS载体的选择 | 第18-19页 |
| 1.2.3 病毒诱导的基因沉默(VIGS)的优缺点 | 第19-20页 |
| 1.3 研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 试验用培养基及抗生素的配制 | 第21页 |
| 2.1.1 试验所用培养基配制 | 第21页 |
| 2.1.2 试验用抗生素配制 | 第21页 |
| 2.1.3 抗性液体和固体培养基配制 | 第21页 |
| 2.2 对VIGS试验空载体的双酶切验证 | 第21-23页 |
| 2.2.1 载体菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 菌液获得 | 第21-22页 |
| 2.2.3 载体质粒的提取 | 第22页 |
| 2.2.4 载体质粒双酶切验证 | 第22-23页 |
| 2.3 重组质粒pTRV-SlPIN的构建 | 第23-26页 |
| 2.3.1 目的片段SlPIN1,SlPIN4扩增(SlPIN3为公司全基因合成) | 第23-24页 |
| 2.3.2 PCR产物凝胶电泳检测 | 第24页 |
| 2.3.3 PCR产物纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.4 目的SlPIN质粒DNA与载体pTRV2双酶切 | 第25页 |
| 2.3.5 双酶切产物纯化和连接 | 第25页 |
| 2.3.6 重组质粒的大肠杆菌转化 | 第25页 |
| 2.3.7 重组质粒pTRV-SlPIN大肠杆菌菌液PCR验证 | 第25-26页 |
| 2.3.8 重组质粒农杆菌GV3101转化 | 第26页 |
| 2.3.9 重组质粒pTRV-SlPIN农杆菌菌液PCR验证(同大肠杆菌PCR验证) | 第26页 |
| 2.4 病毒诱导的基因沉默侵染方法的确定及侵染过程 | 第26-27页 |
| 2.5 农杆菌侵染试验植株 | 第27-28页 |
| 2.6 植株沉默效果的分子检测 | 第28-30页 |
| 2.6.1 番茄花器官与花柄总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.6.2 花器官和花柄cDNA的制备 | 第28-29页 |
| 2.6.3 沉默植株番茄花器官cDNA的RealtimePCR实验 | 第29-30页 |
| 2.6.4 检测沉默目的PIN后,番茄花柄其他PINs表达情况 | 第30页 |
| 2.7 番茄花柄脱落率的测定 | 第30-31页 |
| 2.8 DR5::GUS沉默植株GUS染色 | 第31-32页 |
| 2.8.1 沉默植株花柄外植体染色 | 第31页 |
| 2.8.2 染色及脱色过程 | 第31-32页 |
| 2.9 NMT法测量番茄花柄离区生长素流速 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-50页 |
| 3.1 SlPINs在番茄花柄中特异表达分析 | 第33页 |
| 3.2 VIGS试验空载体pTRV2的双酶切验证 | 第33-34页 |
| 3.3 重组质粒pTRV-PIN1及pTRV-PIN4的构建 | 第34-35页 |
| 3.4 重组质粒大肠杆菌菌液PCR的鉴定 | 第35页 |
| 3.5 重组质粒农杆菌PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 3.6 侵染植株的沉默表达量检测 | 第36-50页 |
| 3.6.1 沉默植株花器官沉默效率检测 | 第36-38页 |
| 3.6.2 沉默目的SlPIN对其他SlPINs表达影响 | 第38-41页 |
| 3.6.3 pTRV-SlPIN沉默植株脱落率的检测 | 第41-43页 |
| 3.6.4 pTRV-SlPIN沉默植株IAA预处理后脱落率的检测 | 第43-45页 |
| 3.6.5 pTRV-SlPIN沉默植株花器官及花柄外植体GUS染色 | 第45-48页 |
| 3.6.6 NMT法测量pTRV-SlPIN株系离区生长素流速 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 生物基因学对番茄SlPIN蛋白的功能分析 | 第50页 |
| 4.2 沉默植株的获得以及特异性蛋白的分子检测 | 第50页 |
| 4.3 SlPIN1在生长素运输及脱落过程中的作用 | 第50-51页 |
| 4.4 SlPIN3在生长素运输及脱落过程中的作用 | 第51页 |
| 4.5 SlPIN4在生长素运输及脱落过程中的作用 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第62-63页 |
