| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-23页 |
| 1.1 代谢工程 | 第7-12页 |
| 1.1.1 代谢工程定义 | 第7页 |
| 1.1.2 代谢工程研究工具 | 第7-10页 |
| 1.1.3 代谢工程应用 | 第10-12页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌简介 | 第12-16页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌宿主优缺点 | 第13-14页 |
| 1.2.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第14-16页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌中氮代谢调控机理 | 第16-17页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌中氨基同化代谢 | 第16页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌TnrA/GlnR调节系统 | 第16-17页 |
| 1.4 Bacillus subtilis中rocG基因及编码产物 | 第17-21页 |
| 1.4.1 rocG基因简介 | 第17-18页 |
| 1.4.2 rocG基因表达及调控机理 | 第18-20页 |
| 1.4.3 rocG基因研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 选题背景及研究思路 | 第21-23页 |
| 1.5.1 选题背景 | 第21-22页 |
| 1.5.2 技术路线与研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 材料方法 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 质粒与菌种 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3 DNA片段的切胶回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 PCR反应体系 | 第31-32页 |
| 2.2.5 PCR-DNA片段纯化 | 第32页 |
| 2.2.6 酶切体系 | 第32页 |
| 2.2.7 内切酶的失活 | 第32-33页 |
| 2.2.8 质粒DNA的去磷酸化 | 第33页 |
| 2.2.9 连接体系的建立 | 第33页 |
| 2.2.10 3’凹端的补平 | 第33-34页 |
| 2.2.11 琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| 2.2.12 枯草芽孢杆菌Spizizen转化 | 第34页 |
| 2.2.13 枯草芽孢杆菌染色体DNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.14 利用α互补筛选目的转化子 | 第34-35页 |
| 2.2.15 菌落PCR | 第35页 |
| 2.2.16 铵根离子测定 | 第35页 |
| 2.2.17 引物设计 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-60页 |
| 3.1 菌株168-P的构建 | 第38-44页 |
| 3.1.1 rocG基因PCR扩增与酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.2 pSG1192-rocG质粒的构建 | 第39页 |
| 3.1.3 pUC18-1 质粒的构建 | 第39-41页 |
| 3.1.4 A片段PCR扩增与酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.1.5 pUC18-2 质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.6 168-F的构建 | 第42-44页 |
| 3.2 菌株168-E的构建 | 第44-52页 |
| 3.2.1 rocG基因PCR扩增与酶切鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.2 ECE149-rocG质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.3 pUC18-A质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.4 Spc基因PCR扩增与酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.5 pUC18-B质粒的构建 | 第49页 |
| 3.2.6 B片段PCR扩增与酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.7 pUC18-C质粒的构建 | 第50-51页 |
| 3.2.8 168-E的构建 | 第51-52页 |
| 3.3 工程菌的发酵试验 | 第52-60页 |
| 3.3.1 菌株168-P摇瓶发酵试验 | 第52-56页 |
| 3.3.2 菌株168-E摇瓶发酵试验 | 第56-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 4.1 结论 | 第60-61页 |
| 4.2 展望 | 第61-62页 |
| 第五章 参考文献 | 第62-69页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |