| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-16页 |
| 1.1 前言 | 第11-12页 |
| 1.2 HIF-1α蛋白的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 HIF-1α的分类及结构特征 | 第12-13页 |
| 1.2.2 HIF-1α的生物学功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3 鱼类HIF-1α的研究进展 | 第14-16页 |
| 第二章 麦穗鱼HIF-1α基因的克隆与生物信息学分析 | 第16-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第16页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 实验仪器和试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 载体和菌种 | 第16页 |
| 2.2 研究方法 | 第16-19页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第16页 |
| 2.2.2 设计PCR引物 | 第16-17页 |
| 2.2.3 麦穗鱼HIF-1α基因的克隆 | 第17-18页 |
| 2.2.4 麦穗鱼HIF-1α基因序列的拼接 | 第18页 |
| 2.2.5 麦穗鱼HIF-1α基因序列全长的验证 | 第18-19页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第19页 |
| 2.3 实验结果 | 第19-33页 |
| 2.3.1 麦穗鱼总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.3.2 麦穗鱼HIF-1α基因的克隆 | 第19-20页 |
| 2.3.4 麦穗鱼HIF-1α基因cDNA序列特征分析 | 第20-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第3章 麦穗鱼HIF-1α基因的缺氧条件下的表达分析 | 第34-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 低氧刺激实验 | 第34-35页 |
| 3.2.2 麦穗鱼HIF-1α基因的荧光定量分析 | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-36页 |
| 3.3.1 麦穗鱼HIF-1α基因在18℃和8℃水温下低氧刺激后在鳃中的表达水平分析 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第4章 麦穗鱼HIF-1α基因的重组表达及抗体制备 | 第38-44页 |
| 4.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.1 质粒、菌种 | 第38页 |
| 4.1.2 主要实验仪器与试剂 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 4.2.1 HIF-1α原核表达引物的设计 | 第38-39页 |
| 4.2.2 HIF-1α原核表达载体的构建 | 第39页 |
| 4.2.3 融合蛋白的原核表达 | 第39-40页 |
| 4.2.4 重组蛋白的可溶性分析及纯化 | 第40-41页 |
| 4.3 实验结果 | 第41-43页 |
| 4.3.1 重组蛋白的表达及纯化 | 第41-42页 |
| 4.3.2 重组蛋白的浓度测定 | 第42页 |
| 4.3.3 抗血清制备及多克隆抗体效价测定 | 第42页 |
| 4.3.4 Western Blot鉴定 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第5章 麦穗鱼HIF-1α蛋白的表达水平与功能分析 | 第44-47页 |
| 5.1 实验材料 | 第44页 |
| 5.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 5.2.1 低氧刺激实验 | 第44-45页 |
| 5.2.2 总蛋白的提取 | 第45页 |
| 5.2.3 Western blot检测HIF-1α在缺氧不同时期的表达量 | 第45页 |
| 5.3 实验结果 | 第45-46页 |
| 5.4 讨论 | 第46-47页 |
| 总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第54页 |
