| 目录 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-35页 |
| 1.1 mTOR信号通路的发现及功能 | 第10-11页 |
| 1.2 mTORC1信号通路下游靶标 | 第11-13页 |
| 1.3 mTORC1信号通路上游调节信号 | 第13-14页 |
| 1.4 氨基酸激活mTORC1的信号通路 | 第14-25页 |
| 1.4.1 Rag GTPases亚家族成员的发现 | 第15-16页 |
| 1.4.2 Rag GTPases介导氨基酸激活mTORC1信号通路 | 第16-18页 |
| 1.4.3 Rag GTPases介导氨基酸激活mTORC1信号通路研究进展 | 第18-25页 |
| 1.5 小结与展望 | 第25-28页 |
| 1.6 本论文选题的目的及意义 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-35页 |
| 第二章 Gtr1p-Gtr2p复合物的表达与纯化 | 第35-47页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第35-39页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第35-38页 |
| 2.1.3 常用实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.2 Gtr1p-Gtr2p复合物的表达与纯化 | 第39-43页 |
| 2.2.1 Gtr1p-Gtr2p cDNA的克隆 | 第39-40页 |
| 2.2.2 Gtr1p-Gtr2p复合物原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.3 Gtr1p-Gtr2p复合物的表达 | 第41页 |
| 2.2.4 Gtr1p-Gtr2p复合物的纯化 | 第41-43页 |
| 2.3 表达纯化结果讨论 | 第43-47页 |
| 2.3.1 Gtr1p-Gtr2p复合物的表达结果 | 第43-44页 |
| 2.3.2 Gtr1p-Gtr2p复合物的Ni~(2+)金属离子亲和层析结果 | 第44页 |
| 2.3.3 Gtr1p-Gtr2p复合物的离子交换层析结果 | 第44-45页 |
| 2.3.4 Gtr1p-Gtr2p复合物的凝胶过滤层析 | 第45-47页 |
| 第三章 Gtr1p-Gtr2p复合物的晶体生长,数据收集及结构解析 | 第47-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第47-48页 |
| 3.1.1 试剂、工具、仪器 | 第47页 |
| 3.1.2 晶体生长,数据收集及结构解析方法 | 第47-48页 |
| 3.2 Gtr1p-Gtr2p复合物晶体的生长与优化 | 第48-49页 |
| 3.3 晶体的数据收集与结构解析 | 第49-53页 |
| 第四章 Gtr1p-Gtr2p复合物晶体的结构分析及基于Gtr1p-Gtr2p复合物晶体结构的Rag GTPases的功能分析 | 第53-88页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第53-54页 |
| 4.1.2 细胞的培养,转染 | 第54页 |
| 4.1.3 免疫共沉淀 | 第54页 |
| 4.1.4 Western Blot | 第54-55页 |
| 4.1.5 免疫荧光 | 第55页 |
| 4.2 Gtr1p-Gtr2p复合物晶体的结构分析 | 第55-59页 |
| 4.2.1 Gtr1p-Gtr2p复合物晶体的总体结构 | 第55-56页 |
| 4.2.2 Gtr1p-Gtr2p复合物晶体的结构特点 | 第56-59页 |
| 4.3 基于Gtr1p-Gtr2p晶体结构的Rag GTPases的功能研究 | 第59-85页 |
| 4.3.1 RagA-RagC结构的完整性对于其功能的影响 | 第61-63页 |
| 4.3.2 RagA GTPase结构域的功能研究 | 第63-70页 |
| 4.3.3 RagA-RagC C端二聚体的功能研究 | 第70-82页 |
| 4.3.4 ：Rag GTPases介导氨基酸激活mTORC1的分子机制 | 第82-83页 |
| 4.3.5 ：Gtr1p~(GTP)-Gtr2p~(GDP)的晶体结构及其理论意义 | 第83-85页 |
| 4.4 总结与展望 | 第85-86页 |
| 主要研究结论 | 第85-86页 |
| 研究展望 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 博士期间发表论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
