| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 1.1 玉米大斑病概况 | 第10页 |
| 1.2 2A 型蛋白磷酸酶 | 第10-11页 |
| 1.3 基因功能的研究方法 | 第11-12页 |
| 1.4 本论文的研究意义及研究内容 | 第12-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第13-16页 |
| 2.1.1 菌株、寄主及质粒 | 第13页 |
| 2.1.2 试剂及溶液 | 第13-14页 |
| 2.1.3 培养基 | 第14-15页 |
| 2.1.4 玉米大斑病菌基因组 DNA、RNA 及大肠杆菌质粒的提取 | 第15-16页 |
| 2.2 抑制剂试验 | 第16-18页 |
| 2.2.1 斑蝥素对菌丝生长的影响 | 第16页 |
| 2.2.2 斑蝥素对病菌产孢量的影响 | 第16-17页 |
| 2.2.3 斑蝥素对病菌孢子的萌发、附着胞形成及侵染的影响 | 第17页 |
| 2.2.4 斑蝥素对病菌黑色素合成的影响 | 第17页 |
| 2.2.5 斑蝥素对病菌 HT-毒素生物活性的影响 | 第17-18页 |
| 2.3 StPP2A-c 基因沉默转化子的创制及分析 | 第18-21页 |
| 2.3.1 引物的设计 | 第18页 |
| 2.3.2 PCR 的扩增 | 第18页 |
| 2.3.3 PCR 扩增产物的回收 | 第18-19页 |
| 2.3.4 PCR 扩增产物的克隆测序 | 第19-20页 |
| 2.3.5 目的片段与目标载体的连接 | 第20页 |
| 2.3.6 pSilent-1 质粒与 StPP2A1 片段的连接、转化及验证 | 第20-21页 |
| 2.3.7 pSilent- StPP2A1 质粒及 StPP2A2 片段阳性克隆质粒的酶切 | 第21页 |
| 2.3.8 pSilent-StPP2A1 质粒与 StPP2A2 片段的连接、转化及验证 | 第21页 |
| 2.4 玉米大斑病菌 StPP2A-c 基因转化子的创制 | 第21-25页 |
| 2.4.1 StPP2A-c 基因敲除载体及 RNAi 载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第21-22页 |
| 2.4.2 玉米大斑病菌 StPP2A-c 基因敲除突变体获得 | 第22-25页 |
| 2.4.3 玉米大斑病菌 StPP2A-c RNAi 转化子获得 | 第25页 |
| 2.5 玉米大斑病菌 StPP2A-c 敲除转化子分析 | 第25-29页 |
| 2.5.1 转化子表型分析及菌丝形态的显微观察 | 第25-26页 |
| 2.5.2 转化子生长速度和产孢量的测定 | 第26页 |
| 2.5.3 转化子孢子的萌发、附着胞形成及穿透的情况 | 第26页 |
| 2.5.4 转化子的穿透能力观察 | 第26页 |
| 2.5.5 转化子的胞内黑色素分析 | 第26页 |
| 2.5.6 转化子的胞壁降解酶活性测定 | 第26-27页 |
| 2.5.7 转化子的致病力分析 | 第27页 |
| 2.5.8 转化子的 HT-毒素分析 | 第27页 |
| 2.5.9 转化子的次生代谢产物的高效液相色谱分析 | 第27页 |
| 2.5.10 转化子的侵染寄主组织组织病理学分析 | 第27-28页 |
| 2.5.11 转化子的细胞壁对 H2O2的敏感性影响 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-44页 |
| 3.1 斑蝥素对玉米大斑病菌生长发育及致病性的影响 | 第29-32页 |
| 3.1.1 斑蝥素对菌丝生长的影响 | 第29页 |
| 3.1.2 斑蝥素对病菌产孢的影响 | 第29-30页 |
| 3.1.3 斑蝥素对病菌孢子萌发、附着胞形成及穿透的影响 | 第30-31页 |
| 3.1.4 斑蝥素对玉米大斑病菌黑色素合成的影响 | 第31页 |
| 3.1.5 斑蝥素对玉米大斑病菌 HT-毒素活性的影响 | 第31-32页 |
| 3.2 StPP2A-c 基因 RNAi 载体构建 | 第32-34页 |
| 3.2.1 StPP2A-c 基因片段的克隆 | 第32页 |
| 3.2.2 StPP2A-c 基因目的片段连接及酶切 | 第32-33页 |
| 3.2.3 StPP2A-c 基因 RNAi 载体的酶切验证 | 第33-34页 |
| 3.3 玉米大斑病菌 StPP2A-c 基因缺失突变体及 RNAi 转化子的获得 | 第34-36页 |
| 3.3.1 玉米大斑病菌 StPP2A-c 基因缺失突变体获得 | 第34-35页 |
| 3.3.2 玉米大斑病菌 StPP2A-c 基因 RNAi 阳性转化子的获得 | 第35-36页 |
| 3.4 StPPA-c 缺失突变体的表型分析 | 第36-44页 |
| 3.4.1 突变体的菌落及菌丝形态观察 | 第36-37页 |
| 3.4.2 突变体菌株生长速度的测定 | 第37页 |
| 3.4.3 突变体产孢量的测定 | 第37页 |
| 3.4.4 突变体分生孢子萌发、附着胞形成及穿透情况 | 第37-38页 |
| 3.4.5 突变体穿透能力测定 | 第38-39页 |
| 3.4.6 突变体的胞内黑色素分析 | 第39页 |
| 3.4.7 突变体胞壁降解酶活性测定 | 第39-40页 |
| 3.4.8 突变体的组织病理学分析和致病力分析 | 第40-41页 |
| 3.4.9 突变体的粗毒素分析 | 第41-42页 |
| 3.4.10 突变体对 H2O2的敏感性的测定 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 StPP2A-c 基因调控病菌分生孢子的形成 | 第44页 |
| 4.2 StPP2A-c 基因参与 DHN 黑色素的合成调控 | 第44页 |
| 4.3 StPP2A-c 基因与病菌附着胞发育的关系 | 第44-45页 |
| 4.4 StPP2A-c 基因与致病力的关系 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
