| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一部分:文献综述 | 第12-24页 |
| 香稻研究进展 | 第12-24页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstraet | 第13-14页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1. 水稻香味形成的分子机理 | 第14-21页 |
| ·香味物质 | 第14-16页 |
| ·2-AP形成机制研究 | 第16页 |
| ·香味基因定位研究 | 第16-19页 |
| ·Badh2位点突变和香味形成的联系 | 第19页 |
| ·Badh1的研究 | 第19-21页 |
| 2. 影响香味物质积累的因素 | 第21-22页 |
| ·遗传因素 | 第21页 |
| ·生态与环境因素 | 第21-22页 |
| 3. 香米育种研究 | 第22-24页 |
| ·常规杂交香稻育种研究 | 第22-23页 |
| ·分子标记辅助香稻育种研究 | 第23-24页 |
| 第二部分:研究论文 | 第24-73页 |
| 香稻分子育种及香味形成分子机理的初步研究 | 第24-73页 |
| 摘要 | 第24-25页 |
| Abstract | 第25-26页 |
| 引言 | 第26-28页 |
| 一、W香99075和261S水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因克隆及序列分析 | 第28-36页 |
| 材料与方法 | 第28-33页 |
| 1 材料与试剂 | 第28页 |
| ·水稻材料 | 第28页 |
| ·试剂、质粒和菌株 | 第28页 |
| 2 水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因克隆 | 第28-33页 |
| ·水稻总DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因克隆 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的纯化及其目的片段的回收 | 第31页 |
| ·回收PCR产物与pMD 18-T Simple Vector的连接 | 第31页 |
| ·PCR产物与pMD 18-T Simple Vector连接后的转化 | 第31-32页 |
| ·重组载体质粒PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 结果与分析 | 第33-36页 |
| 1 甜菜碱乙醛脱氢酶2基因分段克隆及鉴定 | 第33页 |
| 2 W香99075和261S水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因序列比较 | 第33-36页 |
| 二、香味基因分子标记的建立与辅助育种及香稻基因型鉴定 | 第36-49页 |
| 材料与方法 | 第36-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第36页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| 2 第七外显子突变类型香味基因分子标记的建立 | 第36-37页 |
| ·功能性分子标记引物设计 | 第36-37页 |
| ·M7功能性分子标记验证 | 第37页 |
| ·利用功能性分子标记M7鉴定F_2植株 | 第37页 |
| 3 第二外显子突变类型香稻香味基因分子标记的建立 | 第37-38页 |
| ·功能性分子标记引物设计 | 第37-38页 |
| 4 本实验室收集的香稻基因型分析及主要农艺性状考察 | 第38-39页 |
| ·材料种植 | 第38页 |
| ·香稻基因型分析 | 第38-39页 |
| ·本实验室收集香稻主要农艺性状考察 | 第39页 |
| 5 利用分子标记辅助选育香型两系不育系株系 | 第39-40页 |
| ·回交后代植株香味基因筛选及主要选育过程 | 第39-40页 |
| ·含有香味基因的回交四代BC4F1植株重要农艺性状考察 | 第40页 |
| 结果与分析 | 第40-49页 |
| 1 功能性分子标记M7的建立和鉴定 | 第40-43页 |
| 2 功能性分子标记M2的建立 | 第43页 |
| 3 本实验室收集香稻的基因型分析及部分香稻主要农艺性状考察 | 第43-46页 |
| ·香稻的基因型分析 | 第43-46页 |
| ·本实验室收集的部分香稻主要农艺性状考察 | 第46页 |
| 4 利用分子标记辅助选育香型两系不育系株系 | 第46-49页 |
| 三、水稻香味形成分子机理的初步研究 | 第49-58页 |
| 材料与方法 | 第49-54页 |
| 1. 材料与试剂 | 第49页 |
| ·水稻材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| 2 三种类型香稻甜菜碱乙醛脱氢酶1基因(Badh1)和甜菜碱乙醛脱氢酶2基因(Badh2/badh2)表达研究 | 第49-53页 |
| ·水稻幼嫩种子和叶子总RNA的提取与检测 | 第49-51页 |
| ·RT-PCR检测 | 第51-53页 |
| 3 利用互补试验探索南海318水稻badh2基因的功能 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR分析badh2基因功能 | 第53页 |
| ·氢氧化钾(KOH)浸泡法鉴定叶片香味 | 第53-54页 |
| 4 南海318水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因5’上游序列克隆及分析 | 第54页 |
| 结果与分析 | 第54-58页 |
| 1. 水稻甜菜碱乙醛脱氢酶1基因(Badh1)和水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因(Badh2/badh2)表达分析 | 第54-56页 |
| ·三种类型水稻幼叶Badh2/badh2基因与Badh1基因表达分析 | 第54-55页 |
| ·水稻幼嫩种子不同时期Badh2/badh2基因的表达情况 | 第55-56页 |
| 2 南海318水稻互补试验 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR分析结果 | 第56页 |
| ·通过KOH浸泡水稻叶片分析不同杂交后代香味变化 | 第56-57页 |
| 3 南海318水稻甜菜碱乙醛脱氢酶2基因5’上游序列克隆及分析 | 第57-58页 |
| 四、CaMV35S启动子引导Badh2cDNA序列表达载体构建 | 第58-73页 |
| 材料与方法 | 第58-70页 |
| 1 材料与试剂 | 第58-59页 |
| ·植物材料 | 第58页 |
| ·菌株与质粒 | 第58-59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| 2 Badh2cDNA序列的克隆 | 第59-63页 |
| ·水稻幼叶总RNA的提取与检测 | 第59-60页 |
| ·总RNA中基因组DNA的去除 | 第60页 |
| ·日本晴Badh2基因cDNA序列的克隆与鉴定 | 第60-62页 |
| ·Badh2基因cDNA序列分析 | 第62-63页 |
| 3 中间载体pUC57-35S的构建 | 第63-66页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第63页 |
| ·35S启动子序列的PCR扩增 | 第63-65页 |
| ·pUC57-35S质粒鉴定 | 第65-66页 |
| 4 中间载体pCAMBIA1301-35S--nos的构建 | 第66-67页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第66页 |
| ·pCAMBIA1301-nos质粒的SacI和BamHI双酶切 | 第66页 |
| ·质粒pUC57-35S SacI和BamHI双酶切(同上) | 第66页 |
| ·35 S启动子和质粒pCAMBIA1301-nos酶切后回收大片段连接 | 第66-67页 |
| ·35 S启动子和质粒pCAMBIA1301-nos连接后(pCAMBIA1301-35S-nos)转化(方法同前) | 第67页 |
| ·pCAMBIA1301-35S-nos质粒鉴定 | 第67页 |
| 5 表达载体pCAMBIA1301-35S-Badh2 cDNA-nos的构建 | 第67-70页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第67页 |
| ·pCAMBIA1301-35S-nos质粒的BamHI和SalI双酶切 | 第67-68页 |
| ·pUC57-Badh2 cDNA质粒BamHI和SalI双酶切(同上) | 第68页 |
| ·Badh2 cDNA和质粒pCAMBIA1301-35S-nos酶切后回收大片段连接 | 第68页 |
| ·Badh2cDNA和质粒pCAMBIA1301-35S-nos连接后(pCAMBIA1301-35S-Badh2 cDNA-nos)转化 | 第68页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1301-35S-Badh2 cDNA-nos质粒鉴定 | 第68-70页 |
| 结果与分析 | 第70-73页 |
| 1 互补表达载体的鉴定 | 第70-73页 |
| ·pUC57-Badh2cDNA载体鉴定 | 第70-71页 |
| ·中间载体pUC57-35S鉴定 | 第71页 |
| ·表达载体pCAMBIA1301-35S-Badh2 cDNA-nos鉴定 | 第71-73页 |
| 讨论 | 第73-77页 |
| 1 水稻Badh2基因的多态性及分子标记的建立 | 第73-74页 |
| 2 Badh2/badh2基因在决定水稻香味中具有重要的作用 | 第74-75页 |
| 3 Badh1基因的功能及Badhl基因与Badh2/badh2基因之间存在的联系 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 研究生期间论文及研究成果 | 第83页 |
