| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第19-41页 |
| 1.1 间质干细胞及其来源的EXOSOME | 第19-22页 |
| 1.1.1 间质干细胞的概述 | 第19-20页 |
| 1.1.2 Exosome概述 | 第20-21页 |
| 1.1.3 Exosome转运信号分子在细胞间信号转导中的作用 | 第21-22页 |
| 1.2 间质干细胞及其来源的EXOSOME在再生医学中作用 | 第22-25页 |
| 1.2.1 MSC在再生医学中的作用 | 第22-24页 |
| 1.2.2 MSC-exosome在组织再生中的应用 | 第24-25页 |
| 1.3 MSC及其来源的EXOSOME在皮肤组织再生中作用 | 第25-34页 |
| 1.3.1 皮肤损伤后组织修复的基本过程 | 第25-27页 |
| 1.3.2 MSC治疗皮肤损伤的临床前研究 | 第27-30页 |
| 1.3.3 MSC修复皮肤损伤的临床试验 | 第30-31页 |
| 1.3.4 MSC修复皮肤损伤的临床试验验证 | 第31-34页 |
| 1.3.5 MSC来源的exosome在皮肤组织再生中的作用及其临床应用前景 | 第34页 |
| 1.4 MSC及EXOSOME在皮肤组织再生中所涉及的信号通路 | 第34-40页 |
| 1.4.1 Wnt/β-catenin信号通路 | 第34-37页 |
| 1.4.2 Hippo信号通路 | 第37-40页 |
| 1.5 科学问题的提出 | 第40-41页 |
| 第二章 研究目的、实验方案及意义 | 第41-45页 |
| 2.1 研究目的 | 第41页 |
| 2.1.1 确定hucMSC-Ex对皮肤深Ⅱ度烫伤治疗的有效性并探讨机制 | 第41页 |
| 2.1.2 分析hucMSC-Ex治疗皮肤深Ⅱ度烫伤的安全性并研究其机制 | 第41页 |
| 2.2 实验方案设计 | 第41-44页 |
| 2.3 研究意义 | 第44-45页 |
| 第三章 HUCMSC-EXOSOME转运WNT4活化B-CATENIN促进皮肤深Ⅱ度烫伤组织再生 | 第45-95页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第45-49页 |
| 3.1.1 实验所用细胞 | 第45-46页 |
| 3.1.2 实验所用动物 | 第46页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第46-48页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第48-49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-65页 |
| 3.2.1 HucMSC-exosome分离及鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.2 SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型的建立 | 第50-51页 |
| 3.2.3 HucMSC-Ex对SD大鼠体内深Ⅱ度烫伤的治疗 | 第51-52页 |
| 3.2.4 HucMSC-Ex对体外热激损伤皮肤细胞的修复作用 | 第52页 |
| 3.2.5 皮肤组织病理切片的制作及HE染色 | 第52-53页 |
| 3.2.6 病理切片的HE染色 | 第53-54页 |
| 3.2.7 免疫组织化学染色 | 第54页 |
| 3.2.8 组织免疫荧光染色(IF) | 第54-55页 |
| 3.2.9 细胞免疫荧光染色(IF) | 第55页 |
| 3.2.10 组织和细胞Western blot | 第55-57页 |
| 3.2.11 组织细胞凋亡检测(TUNEL法) | 第57-58页 |
| 3.2.12 流式细胞术检测细胞周期 | 第58页 |
| 3.2.13 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第58-61页 |
| 3.2.15 β-catenin转录活性的检测(Wnt信号luciferase报告系统) | 第61-62页 |
| 3.2.16 慢病毒介导的Wnt4-shRNA干扰 | 第62-63页 |
| 3.2.17 细胞计数 | 第63页 |
| 3.2.18 划痕实验 | 第63-64页 |
| 3.2.19 Luminex分析 | 第64页 |
| 3.2.20 内皮细胞的小管形成实验 | 第64页 |
| 3.2.21 细胞核质分离蛋白提取 | 第64页 |
| 3.2.22 统计分析 | 第64-65页 |
| 3.3 研究结果 | 第65-91页 |
| 3.3.1 HucMSC-exosome(hucMSC-Ex)及HFL1-exosome(HFL1-Ex)的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.3.2 皮肤深Ⅱ度烫伤模型的建立 | 第66-67页 |
| 3.3.3 HucMSC-Ex促进深Ⅱ度烫伤的创面愈合 | 第67-68页 |
| 3.3.4 HucMSC-Ex加速损伤后皮肤组织的再生 | 第68-71页 |
| 3.3.5 HucMSC-Ex促进损伤后皮肤组织新生血管再生 | 第71页 |
| 3.3.6 皮肤细胞体外热激损伤模型的建立 | 第71-73页 |
| 3.3.7 HucMSC-Ex抑制热激引起的皮肤细胞凋亡并促进其增殖 | 第73-74页 |
| 3.3.8 HucMSC-Ex不影响皮肤细胞MAPK信号通路的活化 | 第74-75页 |
| 3.3.9 HucMSC-Ex活化皮肤细胞的AKT信号 | 第75-76页 |
| 3.3.10 HucMSC-Ex通过活化AKT信号通路抑制热损伤引起的细胞凋亡 | 第76-78页 |
| 3.3.11 HucMSC-Ex中可能活化AKT信号通路细胞因子的检测 | 第78-79页 |
| 3.3.12 AKT信号通路的活化不能完全解释hucMSC-Ex对皮肤细胞增殖和迁移的作用 | 第79-80页 |
| 3.3.13 HucMSC-Ex促进皮肤细胞β-catenin的核转位和转录活性 | 第80-82页 |
| 3.3.14 HucMSC-Ex通过Wnt/β-catenin信号通路促进SD大鼠深Ⅱ烫伤的修复 | 第82-83页 |
| 3.3.15 HucMSC-Ex通过转运Wnt4信号分子活化Wnt/β-catenin通路促进损伤皮肤组织再生 | 第83-87页 |
| 3.3.16 HucMSC-Ex介导的Wnt4促进新生皮肤的血管生成 | 第87-89页 |
| 3.3.17 AKT通路和Wnt信号在hucMSC-Ex作用皮肤细胞体系中的调控关系 | 第89-91页 |
| 3.4 讨论 | 第91-95页 |
| 第四章 HucMSC-Ex介导的14-3-3z通过HIPPO-YAP通路协调其自身WNT4信号,控制损伤后皮肤干细胞扩增 | 第95-140页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第97-98页 |
| 4.1.1 实验所用细胞 | 第97页 |
| 4.1.2 实验所用动物 | 第97页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第97-98页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第98页 |
| 4.2 实验方法 | 第98-104页 |
| 4.2.1 HucMSC-exosome分离及鉴定 | 第98页 |
| 4.2.2 SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型的建立 | 第98页 |
| 4.2.3 HucMSC-Ex对SD大鼠体内深Ⅱ度烫伤的治疗 | 第98页 |
| 4.2.4 皮肤组织病理切片的制作及HE染色 | 第98页 |
| 4.2.5 病理切片的HE染色 | 第98-99页 |
| 4.2.6 免疫组织化学染色 | 第99页 |
| 4.2.7 组织免疫荧光染色(IF) | 第99页 |
| 4.2.8 组织和细胞Western blot | 第99页 |
| 4.2.9 实时荧光定量(qRT-PCR) | 第99-100页 |
| 4.2.10 β-catenin转录活性的检测(Wnt信号luciferase报告系统) | 第100页 |
| 4.2.11 慢病毒转染shRNA介导的基因干扰 | 第100-102页 |
| 4.2.12 细胞计数 | 第102页 |
| 4.2.13 细胞核质分离蛋白提取 | 第102页 |
| 4.2.14 高/低细胞生长密度的界定 | 第102-103页 |
| 4.2.15 HucMSC-Ex的质谱分析 | 第103页 |
| 4.2.16 免疫共沉淀(IP) | 第103页 |
| 4.2.17 腺病毒介导的基因过表达 | 第103页 |
| 4.2.18 流式分析CD44的表达 | 第103-104页 |
| 4.2.19 PCR法构建YAP Ser127和LATS Thr1079位点的突变质粒 | 第104页 |
| 4.2.20 YAP转录活性的检测 | 第104页 |
| 4.2.21 统计分析 | 第104页 |
| 4.3 研究结果 | 第104-136页 |
| 4.3.1 细胞增殖和β-catenin的活化在hucMSC-Ex介导的皮肤组织再生过程中呈动态变化 | 第104-106页 |
| 4.3.2 HucMSC-Ex对皮肤干细胞的扩增呈现先促进后抑制的趋势 | 第106-108页 |
| 4.3.3 HucMSC-Ex对皮肤细胞增殖的抑制是依赖于“高细胞密度”的生长条件 | 第108-110页 |
| 4.3.4 靶细胞的高密度生长逆转hucMSC-Ex对β-catenin的活化 | 第110-113页 |
| 4.3.5 HucMSC-Ex促进YAP Ser127的磷酸化和胞质内滞留 | 第113-117页 |
| 4.3.6 HucMSC-Ex对Wnt4/β-catenin信号的抑制作用依赖于YAP Ser127的磷酸化 | 第117-120页 |
| 4.3.7 HucMSC-Ex通过转运14-3-3ζ蛋白促进YAP的磷酸化和胞质内滞留 | 第120-124页 |
| 4.3.8 14-3-3ζ促进YAP磷酸化的过程依赖于p-LATS激酶 | 第124-127页 |
| 4.3.9 p-LATS激酶与其底物YAP结合依赖于14-3-3ζ蛋白 | 第127-132页 |
| 4.3.10 HucMSC-Ex转运的14-3-3ξ限制损伤后皮肤干细胞的扩增和抑制胶原沉积 | 第132-136页 |
| 4.4 讨论 | 第136-140页 |
| 第五章 结论与展望 | 第140-142页 |
| 5.1 结论 | 第140-141页 |
| 5.2 展望 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 在学期间取得的科研成果 | 第155-158页 |
