| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-26页 |
| 1.1 黄曲霉毒素B_1及其研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 黄曲霉毒素B_1的性质 | 第13页 |
| 1.1.2 黄曲霉毒素的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 黄曲霉毒素B_1的限量标准 | 第14-15页 |
| 1.1.4 黄曲霉毒素的检测方法进展 | 第15-17页 |
| 1.2 纳米抗体 | 第17-20页 |
| 1.2.1 纳米抗体的概念 | 第17页 |
| 1.2.2 纳米抗体的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.3 纳米抗体的特性 | 第18-19页 |
| 1.2.4 纳米抗体的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 蛋白质的体外定向进化研究进展 | 第20-24页 |
| 1.3.1 体外定向进化的概述 | 第20-21页 |
| 1.3.2 体外定向进化的建库策略 | 第21页 |
| 1.3.3 体外定向进化的筛选策略 | 第21-24页 |
| 1.3.4 分子定向进化的应用 | 第24页 |
| 1.4 主要研究内容和意义 | 第24-26页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第25-26页 |
| 第2章 抗AFB_1纳米抗体的淘选、原核表达及活性分析 | 第26-45页 |
| 2.1 材料、仪器与试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要溶液和培养基 | 第27-28页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第28-34页 |
| 2.2.1 抗AFB_1纳米抗体文库的救援 | 第28页 |
| 2.2.2 抗AFB_1纳米抗体的淘选与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.3 抗AFB_1纳米抗体的表达与纯化 | 第30-33页 |
| 2.2.4 纳米抗体Nb-G8的热稳定性分析 | 第33页 |
| 2.2.5 纳米抗体Nb-G8-ELISA的建立 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-42页 |
| 2.3.1 抗AFB_1纳米抗体的亲和淘选 | 第34页 |
| 2.3.2 阳性克隆的鉴定 | 第34-37页 |
| 2.3.3 纳米抗体Nb-G8的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.4 纳米抗体Nb-G8的热稳定性分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 Nb-G8-ELISA的建立 | 第39-42页 |
| 2.3.6 交叉反应率 | 第42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-45页 |
| 第3章 基于纳米抗体-碱性磷酸酶融合蛋白一步法ELISA检测AFB_1 | 第45-56页 |
| 3.1 材料、仪器与试剂 | 第45-46页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第45-46页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 3.1.3 主要溶液和培养基 | 第46页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第46-48页 |
| 3.2.1 融合表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.2 融合蛋白的表达与纯化 | 第47页 |
| 3.2.3 融合蛋白的碱性磷酸酶比活力测定 | 第47页 |
| 3.2.4 一步法ELISA体系的优化与建立 | 第47-48页 |
| 3.2.5 样品加标回收 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-54页 |
| 3.3.1 融合表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.2 融合蛋白的表达与纯化 | 第49页 |
| 3.3.3 融合蛋白的碱性磷酸酶比活力测定 | 第49页 |
| 3.3.4 交叉反应 | 第49-50页 |
| 3.3.5 一步法ELISA体系的优化与建立 | 第50-53页 |
| 3.3.6 样品加标回收 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54页 |
| 3.5 小结 | 第54-56页 |
| 第4章 纳米抗体的分子模拟及丙氨酸扫描 | 第56-68页 |
| 4.1 材料、试剂与引物 | 第56-57页 |
| 4.1.1 主要材料及试剂 | 第56页 |
| 4.1.2 主要仪器和溶液 | 第56页 |
| 4.1.3 突变引物 | 第56-57页 |
| 4.2 方法与步骤 | 第57-60页 |
| 4.2.1 纳米抗体Nb-G8的同源建模 | 第57页 |
| 4.2.2 纳米抗体Nb-G8与AFB_1的分子对接 | 第57页 |
| 4.2.3 丙氨酸扫描突变子的构建 | 第57-59页 |
| 4.2.4 突变子的救援 | 第59-60页 |
| 4.2.5 突变子的活性分析 | 第60页 |
| 4.3 结果与分析 | 第60-66页 |
| 4.3.1 纳米抗体Nb-G8的同源建模 | 第60-61页 |
| 4.3.2 纳米抗体Nb-G8与AFB_1的分子对接 | 第61-62页 |
| 4.3.3 抗AFB_1纳米抗体的丙氨酸扫描突变 | 第62-64页 |
| 4.3.4 突变体的活性分析 | 第64-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-67页 |
| 4.5 小结 | 第67-68页 |
| 第5章 抗AFB_1纳米抗体定点饱和突变库的构建、淘选和鉴定 | 第68-84页 |
| 5.1 材料、仪器和试剂 | 第68-69页 |
| 5.1.1 主要材料和试剂 | 第68页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第68-69页 |
| 5.1.3 主要溶液和培养基 | 第69页 |
| 5.1.4 突变引物 | 第69页 |
| 5.2 方法与步骤 | 第69-73页 |
| 5.2.1 饱和突变文库的构建（重叠延伸PCR） | 第69-72页 |
| 5.2.2 饱和突变文库的救援 | 第72页 |
| 5.2.3 抗AFB_1纳米抗体突变子的淘选 | 第72-73页 |
| 5.2.4 噬菌粒的救援和鉴定 | 第73页 |
| 5.2.5 序列分析 | 第73页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第73-81页 |
| 5.3.1 饱和突变文库的构建（重叠延伸PCR） | 第73-75页 |
| 5.3.2 饱和突变文库的阳性率鉴定 | 第75-77页 |
| 5.3.3 抗AFB_1纳米抗体突变子的淘选 | 第77页 |
| 5.3.4 噬菌粒的救援与鉴定 | 第77-79页 |
| 5.3.5 序列与活性分析 | 第79-81页 |
| 5.4 讨论 | 第81-83页 |
| 5.5 小结 | 第83-84页 |
| 第6章 结论与展望 | 第84-86页 |
| 6.1 结论 | 第84-85页 |
| 6.2 展望 | 第85-86页 |
| 附录A | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第95页 |
