| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 布鲁氏菌简介 | 第11-12页 |
| 1.2 人患布病 | 第12-13页 |
| 1.2.1 人间布病情况 | 第12页 |
| 1.2.2 人患布病发病机制 | 第12-13页 |
| 1.2.3 人患布病的防治 | 第13页 |
| 1.3 布鲁氏菌病的细菌学检测方法 | 第13-14页 |
| 1.4 用于布鲁氏菌检测的PCR方法 | 第14-20页 |
| 1.4.1 布鲁氏菌DNA的提取 | 第14-15页 |
| 1.4.2 单引物PCR技术 | 第15-16页 |
| 1.4.3 多重PCR技术 | 第16页 |
| 1.4.4 荧光PCR技术 | 第16-19页 |
| 1.4.5 其他PCR方法 | 第19-20页 |
| 1.5 内参基因的重要性 | 第20-21页 |
| 1.6 单核苷酸多态性（SNP） | 第21-23页 |
| 2 布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验用菌 | 第23页 |
| 2.1.2 实验用试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 试验用仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 实验用探针及引物 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.2 细菌DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.3 布鲁氏菌属标准品的制备 | 第25-27页 |
| 2.2.4 外源性内参重组质粒的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.5 荧光定量PCR反应体系的优化 | 第28页 |
| 2.2.6 多重荧光定量PCR反应体系的建立 | 第28页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR标准曲线的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.8 多重荧光定量PCR方法灵敏性、特异性及重复性检测 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-37页 |
| 2.3.1 标准品的制备 | 第29-31页 |
| 2.3.2 内源性内参基因引物特异性验证 | 第31-32页 |
| 2.3.3 布鲁氏菌荧光定量PCR反应条件的优化 | 第32-35页 |
| 2.3.4 标准曲线的制备 | 第35页 |
| 2.3.5 灵敏性 | 第35-36页 |
| 2.3.6 特异性 | 第36-37页 |
| 2.3.7 重复性 | 第37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-41页 |
| 3 荧光定量PCR方法用于样品检测 | 第41-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验用试剂 | 第41页 |
| 3.1.2 实验用仪器 | 第41页 |
| 3.1.3 病料来源 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1 细菌分离培养 | 第42页 |
| 3.2.2 病料DNA的提取 | 第42-43页 |
| 3.2.3 临床样品的荧光定量PCR检测 | 第43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-45页 |
| 3.3.1 细菌分离培养检测结果 | 第43页 |
| 3.3.2 荧光定量PCR检测结果 | 第43-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 4 布鲁氏菌荧光定量PCR单核苷酸多态性分型方法的建立 | 第47-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验用菌株 | 第47页 |
| 4.1.2 实验用试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 实验用仪器 | 第47-48页 |
| 4.2 方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 单核苷酸多态性位点的筛选 | 第48页 |
| 4.2.2 布鲁氏菌荧光定量PCR单核苷酸多态性基因 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-55页 |
| 4.3.1 布鲁氏菌bp26基因序列比对 | 第49-51页 |
| 4.3.2 引物及探针的设计 | 第51页 |
| 4.3.3 标准品建立 | 第51-52页 |
| 4.3.4 引物温度优化 | 第52-53页 |
| 4.3.5 引物及探针浓度 | 第53-54页 |
| 4.3.6 特异性检测 | 第54页 |
| 4.3.7 灵敏性检测 | 第54页 |
| 4.3.8 重现性检测 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-59页 |
| 5.1 总结 | 第57-58页 |
| 5.2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第66页 |
