符号说明 | 第4-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
1 前言 | 第13-27页 |
1.1 水稻白叶枯病和细菌性条斑病的研究概况 | 第13-18页 |
1.1.1 水稻白叶枯病研究概况 | 第13-16页 |
1.1.1.1 水稻白叶枯病病原菌及发病特点 | 第13页 |
1.1.1.2 水稻白叶枯病抗病基因的研究 | 第13-16页 |
1.1.2 水稻细菌性条斑病研究概况 | 第16-18页 |
1.1.2.1 水稻细菌性条斑病病原菌及发病特点 | 第16页 |
1.1.2.2 水稻细菌性条斑病抗病基因的研究 | 第16-18页 |
1.2 MYB转录因子的研究概况 | 第18-22页 |
1.2.1 MYB转录因子的结构分类 | 第18-19页 |
1.2.2 MYB转录因子的功能研究 | 第19-22页 |
1.2.2.1 参与植物的生长发育 | 第19-20页 |
1.2.2.2 参与植物的初生和次生代谢 | 第20页 |
1.2.2.3 参与细胞的形态和模式建成 | 第20-21页 |
1.2.2.4 参与植物对逆境的响应 | 第21-22页 |
1.3 基因表达谱技术的研究 | 第22-25页 |
1.3.1 RNA-seq技术 | 第22-23页 |
1.3.2 RNA-seq技术在植物中的应用 | 第23-25页 |
1.3.2.1 RNA-seq在水稻中的应用 | 第24页 |
1.3.2.2 RNA-seq在拟南芥中的应用 | 第24-25页 |
1.4 水稻抗性相关基因OsDRxoc1的研究进展 | 第25页 |
1.5 研究目的和意义 | 第25-27页 |
2 材料与方法 | 第27-35页 |
2.1 植物材料和来源 | 第27页 |
2.2 菌株 | 第27页 |
2.3 核酸操作 | 第27-29页 |
2.3.1 水稻总RNA的提取 | 第27页 |
2.3.2 水稻基因组DNA抽提 | 第27-28页 |
2.3.3 质粒抽提 | 第28页 |
2.3.4 PCR产物纯化及回收 | 第28页 |
2.3.5 酶切反应 | 第28页 |
2.3.6 连接反应 | 第28页 |
2.3.7 PCR阳性鉴定 | 第28页 |
2.3.8 基因OsDRxoc1和GFP融合PCR反应 | 第28-29页 |
2.3.9 克隆载体序列测定 | 第29页 |
2.4 农杆菌介导的遗传转化 | 第29页 |
2.5 转基因植株PCR阳性鉴定 | 第29页 |
2.6 转基因水稻接种分析 | 第29-30页 |
2.6.1 细菌性条斑病接种和病情鉴定 | 第29-30页 |
2.6.2 白叶枯病接种和病情鉴定 | 第30页 |
2.7 反转录PCR和荧光定量PCR | 第30页 |
2.8 植株叶绿素含量的测定 | 第30-31页 |
2.9 蛋白操作 | 第31-32页 |
2.9.1 植物蛋白的提取 | 第31页 |
2.9.2 蛋白免疫印迹杂交(Western blot) | 第31-32页 |
2.10 亚细胞定位 | 第32-33页 |
2.11 转录激活验证 | 第33页 |
2.12 表达谱测序 | 第33-35页 |
2.12.1 RNA样品的准备 | 第33页 |
2.12.2 RNA样品的质量检测 | 第33页 |
2.12.3 RNA-seq的测序实验流程 | 第33页 |
2.12.4 RNA-seq的测序信息分析流程 | 第33-35页 |
3 结果与分析 | 第35-63页 |
3.1 OsDRxoc1基因的病原诱导表达分析 | 第35-36页 |
3.2 OsDRxoc1亚细胞定位分析 | 第36页 |
3.3 OsDRxoc1具有转录激活的功能 | 第36-37页 |
3.4 OsDRxoc1在水稻中的表达模式 | 第37-38页 |
3.5 OsDRxoc1转基因水稻植株T_1代接种检测 | 第38-44页 |
3.5.1 T_1代植株对细菌性条斑病的抗性检测 | 第38-40页 |
3.5.2 T_1代植株对白叶枯病的抗性检测 | 第40-44页 |
3.6 OsDRxoc1转基因水稻植株T_1代叶绿素含量的测定 | 第44-45页 |
3.7 抗病相关基因的表达 | 第45-46页 |
3.8 OsDRxoc1转基因植株转录组测序 | 第46-54页 |
3.8.1 RNA样品的提取及测序质量检测 | 第46-49页 |
3.8.1.1 RNA样品质量的检测 | 第46页 |
3.8.1.2 测序质量评估 | 第46-47页 |
3.8.1.3 测序饱和度分析 | 第47-48页 |
3.8.1.4 基因覆盖度统计 | 第48页 |
3.8.1.5 测序数据比对统计 | 第48-49页 |
3.8.2 OsDRxoc1转基因植株转录组测序结果分析 | 第49-54页 |
3.8.2.1 差异表达基因筛选 | 第49页 |
3.8.2.2 差异表达基因的GO功能分类 | 第49-52页 |
3.8.2.3 差异表达基因的Pathway显著性富集分析 | 第52-54页 |
3.9 对转录组测序中差异表达基因的验证分析 | 第54-59页 |
3.9.1 荧光定量PCR验证差异表达基因 | 第54-56页 |
3.9.2 差异表达基因启动子的克隆与分析 | 第56-59页 |
3.10 OsDRxoc1融合GFP基因的遗传转化 | 第59-63页 |
3.10.1 OsDRxoc1融合GFP载体的构建 | 第59-60页 |
3.10.2 pCXUN::DRxoc1-GFP的水稻遗传转化 | 第60页 |
3.10.3 转基因植株表达检测 | 第60-61页 |
3.10.4 转基因植株接种细菌性条斑病菌 | 第61-62页 |
3.10.5 转基因植株的蛋白表达检测 | 第62-63页 |
4 讨论 | 第63-66页 |
4.1 OsDRxoc1作为MYB类转录因子参与水稻抗病反应的探究 | 第63-64页 |
4.2 OsDRxoc1基因参与抗病反应路径的探究 | 第64页 |
4.3 OsDRxoc1基因对叶绿素影响的探究 | 第64-66页 |
5 结论 | 第66-68页 |
5.1 OsDRxoc1参与正调控细菌性条斑病、负调控白叶枯病的抗性过程 | 第66页 |
5.2 OsDRxoc1基因影响叶绿体的发育 | 第66-67页 |
5.3 创制了OsDRxoc1的C端带GFP标签的转基因水稻材料 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-79页 |
附录Ⅰ | 第79-81页 |
附录Ⅱ | 第81-84页 |
致谢 | 第84-85页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第85页 |