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OsDRxoc1转基因水稻抗细菌病害的功能分析

符号说明第4-9页
中文摘要第9-11页
Abstract第11-12页
1 前言第13-27页
    1.1 水稻白叶枯病和细菌性条斑病的研究概况第13-18页
        1.1.1 水稻白叶枯病研究概况第13-16页
            1.1.1.1 水稻白叶枯病病原菌及发病特点第13页
            1.1.1.2 水稻白叶枯病抗病基因的研究第13-16页
        1.1.2 水稻细菌性条斑病研究概况第16-18页
            1.1.2.1 水稻细菌性条斑病病原菌及发病特点第16页
            1.1.2.2 水稻细菌性条斑病抗病基因的研究第16-18页
    1.2 MYB转录因子的研究概况第18-22页
        1.2.1 MYB转录因子的结构分类第18-19页
        1.2.2 MYB转录因子的功能研究第19-22页
            1.2.2.1 参与植物的生长发育第19-20页
            1.2.2.2 参与植物的初生和次生代谢第20页
            1.2.2.3 参与细胞的形态和模式建成第20-21页
            1.2.2.4 参与植物对逆境的响应第21-22页
    1.3 基因表达谱技术的研究第22-25页
        1.3.1 RNA-seq技术第22-23页
        1.3.2 RNA-seq技术在植物中的应用第23-25页
            1.3.2.1 RNA-seq在水稻中的应用第24页
            1.3.2.2 RNA-seq在拟南芥中的应用第24-25页
    1.4 水稻抗性相关基因OsDRxoc1的研究进展第25页
    1.5 研究目的和意义第25-27页
2 材料与方法第27-35页
    2.1 植物材料和来源第27页
    2.2 菌株第27页
    2.3 核酸操作第27-29页
        2.3.1 水稻总RNA的提取第27页
        2.3.2 水稻基因组DNA抽提第27-28页
        2.3.3 质粒抽提第28页
        2.3.4 PCR产物纯化及回收第28页
        2.3.5 酶切反应第28页
        2.3.6 连接反应第28页
        2.3.7 PCR阳性鉴定第28页
        2.3.8 基因OsDRxoc1和GFP融合PCR反应第28-29页
        2.3.9 克隆载体序列测定第29页
    2.4 农杆菌介导的遗传转化第29页
    2.5 转基因植株PCR阳性鉴定第29页
    2.6 转基因水稻接种分析第29-30页
        2.6.1 细菌性条斑病接种和病情鉴定第29-30页
        2.6.2 白叶枯病接种和病情鉴定第30页
    2.7 反转录PCR和荧光定量PCR第30页
    2.8 植株叶绿素含量的测定第30-31页
    2.9 蛋白操作第31-32页
        2.9.1 植物蛋白的提取第31页
        2.9.2 蛋白免疫印迹杂交(Western blot)第31-32页
    2.10 亚细胞定位第32-33页
    2.11 转录激活验证第33页
    2.12 表达谱测序第33-35页
        2.12.1 RNA样品的准备第33页
        2.12.2 RNA样品的质量检测第33页
        2.12.3 RNA-seq的测序实验流程第33页
        2.12.4 RNA-seq的测序信息分析流程第33-35页
3 结果与分析第35-63页
    3.1 OsDRxoc1基因的病原诱导表达分析第35-36页
    3.2 OsDRxoc1亚细胞定位分析第36页
    3.3 OsDRxoc1具有转录激活的功能第36-37页
    3.4 OsDRxoc1在水稻中的表达模式第37-38页
    3.5 OsDRxoc1转基因水稻植株T_1代接种检测第38-44页
        3.5.1 T_1代植株对细菌性条斑病的抗性检测第38-40页
        3.5.2 T_1代植株对白叶枯病的抗性检测第40-44页
    3.6 OsDRxoc1转基因水稻植株T_1代叶绿素含量的测定第44-45页
    3.7 抗病相关基因的表达第45-46页
    3.8 OsDRxoc1转基因植株转录组测序第46-54页
        3.8.1 RNA样品的提取及测序质量检测第46-49页
            3.8.1.1 RNA样品质量的检测第46页
            3.8.1.2 测序质量评估第46-47页
            3.8.1.3 测序饱和度分析第47-48页
            3.8.1.4 基因覆盖度统计第48页
            3.8.1.5 测序数据比对统计第48-49页
        3.8.2 OsDRxoc1转基因植株转录组测序结果分析第49-54页
            3.8.2.1 差异表达基因筛选第49页
            3.8.2.2 差异表达基因的GO功能分类第49-52页
            3.8.2.3 差异表达基因的Pathway显著性富集分析第52-54页
    3.9 对转录组测序中差异表达基因的验证分析第54-59页
        3.9.1 荧光定量PCR验证差异表达基因第54-56页
        3.9.2 差异表达基因启动子的克隆与分析第56-59页
    3.10 OsDRxoc1融合GFP基因的遗传转化第59-63页
        3.10.1 OsDRxoc1融合GFP载体的构建第59-60页
        3.10.2 pCXUN::DRxoc1-GFP的水稻遗传转化第60页
        3.10.3 转基因植株表达检测第60-61页
        3.10.4 转基因植株接种细菌性条斑病菌第61-62页
        3.10.5 转基因植株的蛋白表达检测第62-63页
4 讨论第63-66页
    4.1 OsDRxoc1作为MYB类转录因子参与水稻抗病反应的探究第63-64页
    4.2 OsDRxoc1基因参与抗病反应路径的探究第64页
    4.3 OsDRxoc1基因对叶绿素影响的探究第64-66页
5 结论第66-68页
    5.1 OsDRxoc1参与正调控细菌性条斑病、负调控白叶枯病的抗性过程第66页
    5.2 OsDRxoc1基因影响叶绿体的发育第66-67页
    5.3 创制了OsDRxoc1的C端带GFP标签的转基因水稻材料第67-68页
参考文献第68-79页
附录Ⅰ第79-81页
附录Ⅱ第81-84页
致谢第84-85页
攻读学位期间发表论文情况第85页

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