| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 金属铅危害简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 铅危害的研究进展 | 第12页 |
| 1.1.2 铅对斑马鱼发育的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.3 铅对动物消化系统的影响 | 第13页 |
| 1.2 Bach/Nrf-MafK途径研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 Bach蛋白研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.2 Nrf蛋白研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.3 MafK表达模式研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.4 胰外分泌酶原基因的研究 | 第16页 |
| 1.2.5 Bach/Nrf-MafK途径研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 本研究目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 实验材料的来源和饲养 | 第19页 |
| 2.1.2 工具酶、试剂盒和主要生化试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第20页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第20-23页 |
| 2.1.5 主要实验试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 序列分析 | 第24-25页 |
| 2.2.2 超表达载体的构建和地高辛标记的RNA探针的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 斑马鱼基因组的提取 | 第26页 |
| 2.2.4 tryl基因上游调控区及MARE位点截断片段的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5 八个PCR片段的加尾反应 | 第27-28页 |
| 2.2.6 目的片段与载体的连接 | 第28-29页 |
| 2.2.7 双酶切检测重组质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.8 细胞转染 | 第29-30页 |
| 2.2.9 整体原位杂交试验材料的处理和收集 | 第30页 |
| 2.2.10 Real-time PCR | 第30-31页 |
| 2.2.11 MTT法检测醋酸铅处理ZF4细胞的存活率 | 第31-32页 |
| 3 实验结果分析 | 第32-60页 |
| 3.1 bach/nrf基因的超表达载体的构建及生物信息学分析 | 第32-37页 |
| 3.1.1 六个nrf基因超表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.2 三个bach基因超表达载体的构建 | 第33页 |
| 3.1.3 硬骨鱼中6个nrf基因的搜寻及编码蛋白序列的分析 | 第33-35页 |
| 3.1.4 斑马鱼6个Nrf蛋白的系统进化分析 | 第35-37页 |
| 3.2 斑马鱼6个nrf基因的时空表达研究 | 第37-39页 |
| 3.3 Bach/Nrf-MafK对胰外分泌酶原基因表达的影响 | 第39-48页 |
| 3.3.1 tryl基因的上游调控区的克隆及质粒构建 | 第39-40页 |
| 3.3.2 双荧光素酶检测tryl上游调控区的活性 | 第40页 |
| 3.3.3 双荧光素酶检测调控因子MafK的最适浓度 | 第40-41页 |
| 3.3.4 调控因子bach基因的超表达对tryl表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.5 调控因子nrf基因的超表达对tryl表达的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.6 不同的旁系同源基因组合后对tryl表达的影响 | 第44-48页 |
| 3.4 MARE位点缺失对tryl基因上游调控区的影响 | 第48-51页 |
| 3.4.1 tryl上游调控区MARE位点缺失酶切检测 | 第48-49页 |
| 3.4.2 MARE位点缺失对tryl上游调控区功能的影响 | 第49-51页 |
| 3.5 铅通过Bach/Nrf-MafK对胰外分泌酶原基因表达的分子机制 | 第51-60页 |
| 3.5.1 MTT法检测醋酸铅处理后293细胞的活力 | 第51-52页 |
| 3.5.2 双荧光素酶检测硝酸铅对tryl表达的影响 | 第52页 |
| 3.5.3 双荧光素酶检测醋酸铅对tryl表达的影响 | 第52-53页 |
| 3.5.4 双荧光素酶检测醋酸铅处理后Bach/Nrf路径对tryl表达的影响 | 第53-56页 |
| 3.5.5 Real-time PCR检测醋酸铅对Bach/Nrf-MafK途径相关基因的影响 | 第56-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 斑马鱼6个nrf基因表达差异及功能歧化的研究 | 第60-61页 |
| 4.2 醋酸铅通过Bach/Nrf-MafK途径调节tryl基因的表达 | 第61-62页 |
| 4.3 tryl基因上游调控区MARE位点缺失的效应 | 第62-63页 |
| 4.4 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 在校期间论文发表情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-87页 |
