| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| English Catalog | 第12-16页 |
| 1 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 野猪的遗传学研究与开发利用进展 | 第16-19页 |
| 1.1.1 野猪的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.1.2 野猪与家猪的起源进化关系 | 第17-18页 |
| 1.1.3 野猪的开发利用前景 | 第18-19页 |
| 1.2 哺乳动物细胞冷应激研究进展 | 第19-26页 |
| 1.2.1 冷应激对细胞生物学的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.2 冷应激对细胞基因表达的影响 | 第21-26页 |
| 1.3 课题研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 2 东北野猪成纤维细胞分离与培养 | 第28-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 耳皮肤组织原代培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 细胞传代培养 | 第30页 |
| 2.2.3 细胞冷冻保存 | 第30页 |
| 2.2.4 细胞的复苏 | 第30-31页 |
| 2.2.5 细胞活率检测 | 第31页 |
| 2.2.6 细胞生长曲线测定 | 第31页 |
| 2.2.7 细菌、真菌检测 | 第31页 |
| 2.2.8 支原体检测 | 第31-32页 |
| 2.2.9 病毒检测 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-36页 |
| 2.3.1 细胞原代培养 | 第32-33页 |
| 2.3.2 原代细胞形态学观察 | 第33页 |
| 2.3.3 细胞传代培养 | 第33-34页 |
| 2.3.4 细胞冻存前及复苏后细胞活率 | 第34页 |
| 2.3.5 传代细胞生长曲线测定 | 第34-35页 |
| 2.3.6 细菌、真菌检测 | 第35页 |
| 2.3.7 支原体检测 | 第35-36页 |
| 2.3.8 病毒检测 | 第36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 2.4.1 实验取材 | 第36页 |
| 2.4.2 细胞原代和传代培养 | 第36-37页 |
| 2.4.3 原代细胞形态观察 | 第37页 |
| 2.4.4 细胞冷冻保存和复苏 | 第37页 |
| 2.4.5 细胞微生物污染 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 3 冷诱导RNA结合蛋白cDNA的克隆 | 第39-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第39页 |
| 3.1.2 菌种和克隆载体 | 第39页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.5 主要溶液试剂配制 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 细胞冷处理 | 第40页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.2.3 总RNA检测 | 第41页 |
| 3.2.4 东北野猪CIRP基因克隆用引物设计 | 第41页 |
| 3.2.5 cDNA 合成 | 第41页 |
| 3.2.6 PCR 扩増 | 第41-42页 |
| 3.2.7 PCR产物电泳检测 | 第42页 |
| 3.2.8 感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 3.2.9 目的基因的回收 | 第42-43页 |
| 3.2.10 回收片段同T载体旳连接 | 第43页 |
| 3.2.11 重组质粒的转化 | 第43-44页 |
| 3.2.12 转化菌落的PCR鉴定与培养 | 第44页 |
| 3.2.13 重组质粒的提取 | 第44页 |
| 3.2.14 重组质粒的双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.15 序列测定及分析 | 第45页 |
| 3.3 结果 | 第45-49页 |
| 3.3.1 RNA提取结果 | 第45页 |
| 3.3.2 RT-PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| 3.3.3 转化质粒的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.4 质粒双酶切鉴定结果 | 第47页 |
| 3.3.5 序列分析 | 第47-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 4 冷应激对细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第51-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.1 试验细胞 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 4.2 方法 | 第51-53页 |
| 4.2.1 细胞低温培养和复温培养 | 第51页 |
| 4.2.2 细胞周期检测 | 第51-52页 |
| 4.2.3 细胞凋亡检测 | 第52-53页 |
| 4.2.4 数据分析 | 第53页 |
| 4.3 结果 | 第53-60页 |
| 4.3.1 低温培养对细胞周期的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.2 复温培养对细胞周期的影响 | 第54-56页 |
| 4.3.3 低温培养对细胞凋亡的影响 | 第56-58页 |
| 4.3.4 复温培养对细胞凋亡的影响 | 第58-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-61页 |
| 4.4.1 冷应激对细胞周期的影响 | 第60页 |
| 4.4.2 冷应激对细胞凋亡的影响 | 第60-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 5 冷应激对成纤维细胞HSP70、HSP90和CIRP mRNA表达的影响 | 第62-81页 |
| 5.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.1 实验细胞 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第62页 |
| 5.2 方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 实验设计 | 第62-63页 |
| 5.2.2 总RNA的提取 | 第63页 |
| 5.2.3 引物设计与合成 | 第63页 |
| 5.2.4 cDNA合成 | 第63页 |
| 5.2.5 荧光定量PCR反应 | 第63-64页 |
| 5.2.6 PCR产物的分析 | 第64页 |
| 5.2.7 统计分析 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-78页 |
| 5.3.1 低温培养对HSP70 mRNA表达的影响 | 第64-66页 |
| 5.3.2 复温培养对HSP70 mRNA表达的影响 | 第66-69页 |
| 5.3.3 低温培养对HSP90 mRNA表达的影响 | 第69-71页 |
| 5.3.4 复温培养对HSP90 mRNA表达的影响 | 第71-74页 |
| 5.3.5 低温培养对CIRP mRNA表达的影响 | 第74-76页 |
| 5.3.6 复温培养对CIRP mRNA表达的影响 | 第76-78页 |
| 5.4 讨论 | 第78-80页 |
| 5.4.1 冷应激对HSP70和HSP90表达的影响 | 第78-79页 |
| 5.4.2 冷应激对CIRP mRNA表达的影响 | 第79-80页 |
| 5.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
