| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 启动子概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 植物启动子的基本结构 | 第12-14页 |
| 1.1.2 植物中受水杨酸调控的启动子的研究 | 第14-16页 |
| 1.2 谷胱甘肽S转移酶简述 | 第16-17页 |
| 1.2.1 GST的结构 | 第16页 |
| 1.2.2 GST的功能 | 第16-17页 |
| 1.3 遗传转化 | 第17-20页 |
| 1.3.1 农杆菌介导的稳定遗传转化 | 第17页 |
| 1.3.2 瞬时转化方法 | 第17-20页 |
| 1.3.2.1 农杆菌渗透法 | 第18-19页 |
| 1.3.2.2 原生质体转化 | 第19-20页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第21-23页 |
| 2.1.3 试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 植物细胞培养基 | 第24页 |
| 2.1.5 细菌培养基 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 植物材料准备 | 第24-25页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 RNA提取 | 第25页 |
| 2.2.2.2 RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.2.3 CiGSTU19基因启动子克隆 | 第26-30页 |
| 2.2.3.1 染色体步移文库构建 | 第26-27页 |
| 2.2.3.2 CiGSTU19启动子PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3.3 扩增产物回收 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 TA克隆 | 第29页 |
| 2.2.3.5 E.coli DH5α感受态细胞的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.4 CiGSTU19基因启动子缺失载体构建 | 第30-33页 |
| 2.2.4.1 设计引物 | 第30页 |
| 2.2.4.2 PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.4.3 扩增产物回收 | 第31页 |
| 2.2.4.4 TA克隆 | 第31页 |
| 2.2.4.5 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.2.4.6 重组载体构建 | 第32页 |
| 2.2.4.7 重组质粒转化农杆菌感受态细胞及筛选鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.5 拟南芥转化 | 第33-34页 |
| 2.2.5.1 拟南芥种植 | 第33页 |
| 2.2.5.2 拟南芥转化 | 第33页 |
| 2.2.5.3 转基因拟南芥抗性筛选及移栽 | 第33-34页 |
| 2.2.6 原生质体转化 | 第34-35页 |
| 2.2.6.1 分离原生质体 | 第34页 |
| 2.2.6.2 DNA-PEG-钙转化 | 第34页 |
| 2.2.6.3 原生质体培养 | 第34-35页 |
| 2.2.6.4 报告基因检测 | 第35页 |
| 2.2.7 GUS活性测定 | 第35-38页 |
| 2.2.7.1 植物组织的GUS染色 | 第35页 |
| 2.2.7.2 GUS活性的荧光定量测定 | 第35-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-58页 |
| 3.1 诱导剂的确定 | 第38-39页 |
| 3.1.1 诱导剂的种类筛选 | 第38页 |
| 3.1.2 诱导剂水杨酸浓度的确定 | 第38-39页 |
| 3.2 水杨酸诱导的候选基因的选择 | 第39-42页 |
| 3.2.1 RNA提取及检测 | 第39-40页 |
| 3.2.2 候选基因的诱导表达情况分析 | 第40-41页 |
| 3.2.3 CiGSTU19诱导表达分析 | 第41-42页 |
| 3.3 CIGSTU19启动子的克隆和生物信息学元件分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 DNA提取及检测 | 第42页 |
| 3.3.2 染色体步移文库构建 | 第42-44页 |
| 3.3.3 CiGSTU19启动子元件分析 | 第44-46页 |
| 3.4 CIGSTU19基因的特征 | 第46-47页 |
| 3.5 CIGSTU19的转录调控模式 | 第47-58页 |
| 3.5.1 构建启动子缺失片段载体 | 第47-54页 |
| 3.5.1.1 PCAMBIA1391Z系列载体构建 | 第47-50页 |
| 3.5.1.2 pCAMBIA1301和pCAMBIA1302系列载体构建 | 第50-54页 |
| 3.5.2 遗传转化分析 | 第54-55页 |
| 3.5.3 原生质体瞬时表达分析 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 水杨酸处理的时间、剂量 | 第58页 |
| 4.2 启动子表达分析 | 第58-59页 |
| 4.3 瞬时转化表达分析 | 第59-60页 |
| 4.4 人工合成启动子 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
