| 致谢 | 第4-5页 |
| 符号表 | 第5-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-19页 |
| 1. 猪流行性腹泻的流性特征 | 第13-14页 |
| 1.1 猪流行性腹泻临床流行病学 | 第13页 |
| 1.2 猪流行性腹泻分子流行病学 | 第13-14页 |
| 2. 猪流行性腹泻病毒生物学特性 | 第14页 |
| 3. 猪流行性腹泻病毒的基因组结构特点 | 第14-15页 |
| 3.1 S蛋白结构功能 | 第14页 |
| 3.2 M蛋白结构功能 | 第14-15页 |
| 3.3 N蛋白结构功能 | 第15页 |
| 3.4 E蛋白结构功能 | 第15页 |
| 4. 猪流行性腹泻诊断技术 | 第15-16页 |
| 4.1 酶联免疫吸附试验 | 第15-16页 |
| 4.2 RT-PCR法 | 第16页 |
| 4.3 Taq Man荧光定量PCR | 第16页 |
| 4.4 胶体金免疫层析技术 | 第16页 |
| 5. 猪流行性腹泻的综合防控 | 第16-17页 |
| 6. 猪流行性腹泻疫苗的研究 | 第17页 |
| 6.1 灭活疫苗 | 第17页 |
| 6.2 弱毒疫苗 | 第17页 |
| 6.3 多价联合疫苗 | 第17页 |
| 6.4 转基因植物疫苗 | 第17页 |
| 7 单克隆抗体在鉴别诊断方面的研究和应用 | 第17-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 试验一 PEDV单克隆抗体抗原的增殖与纯化 | 第20-27页 |
| 1. 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1.1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 实验动物与毒株 | 第20页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 1.1.3 常用溶液及其配制 | 第20-21页 |
| 1.1.4 主要实验仪器设备 | 第21页 |
| 1.2 实验方法 | 第21-23页 |
| 1.2.1 猪流行性腹泻病毒的增殖与纯化 | 第21-23页 |
| 1.2.1.1 病毒的增殖 | 第21-22页 |
| 1.2.1.2 猪流行性腹泻病毒的TCID50测定 | 第22页 |
| 1.2.1.3 猪流行性腹泻病毒的PCR鉴定 | 第22页 |
| 1.2.1.4 猪流行性腹泻病毒的纯化 | 第22-23页 |
| 2. 结果与分析 | 第23-25页 |
| 2.1 猪流行性腹泻病毒的增殖与纯化 | 第23-25页 |
| 2.1.1 猪流行性腹泻的增殖 | 第23页 |
| 2.1.2 PEDV的TCID50测定 | 第23-24页 |
| 2.1.3 猪流行性腹泻病毒的PCR鉴定 | 第24页 |
| 2.1.4 猪流行性腹泻病毒的纯化 | 第24-25页 |
| 3 结论与讨论 | 第25-27页 |
| 3.1 猪流行性腹泻病毒的增殖与纯化 | 第25-27页 |
| 试验二PEDV单克隆抗体杂交瘤细胞株建立 | 第27-39页 |
| 1 材料和方法 | 第27-34页 |
| 1.1 材料 | 第27-30页 |
| 1.1.1 细胞、实验动物、疫苗及血清 | 第27页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 1.1.4 常用溶液及其配制 | 第28-30页 |
| 1.1.4.1 细胞培养试剂 | 第28-29页 |
| 1.1.4.2 ELISA用试剂 | 第29-30页 |
| 1.2 方法 | 第30-34页 |
| 1.2.1 小鼠免疫 | 第30页 |
| 1.2.2 检测PEDV抗体的间接ELISA方法建立 | 第30-31页 |
| 1.2.2.1 间接ELISA方法操作步骤 | 第30-31页 |
| 1.2.2.2 矩阵法确定进行抗原的包被浓度和抗体的稀释度 | 第31页 |
| 1.2.2.3 酶标二抗最佳工作浓度确定 | 第31页 |
| 1.2.2.4 抗原最佳包被条件的确定 | 第31页 |
| 1.2.2.5 封闭剂的选择 | 第31页 |
| 1.2.3 免疫小鼠血清效价的检测 | 第31-32页 |
| 1.2.4 杂交瘤细胞株的建立 | 第32-34页 |
| 1.2.4.1 饲养细胞的制备 | 第32页 |
| 1.2.4.2 SP2/0 细胞的准备 | 第32页 |
| 1.2.4.3 脾细胞的制备 | 第32-33页 |
| 1.2.4.4 细胞融合 | 第33页 |
| 1.2.4.5 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第33-34页 |
| 1.2.4.6 采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆 | 第34页 |
| 2. 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.1 间接ELISA方法的建立 | 第34-36页 |
| 2.1.1 抗原抗体最佳稀释度的检测结果 | 第34-35页 |
| 2.1.2 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第35页 |
| 2.1.3 抗原最佳包被条件的测定结果 | 第35-36页 |
| 2.1.4 用三种不同的封闭剂的检测结果 | 第36页 |
| 2.2 免疫小鼠血清效价的检测结果 | 第36页 |
| 2.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第36-37页 |
| 3. 结果讨论 | 第37-39页 |
| 试验三 PEDV单克隆抗体腹水的制备 | 第39-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第39-43页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第39页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 1.1.3 细胞及实验动物 | 第39-40页 |
| 1.1.4 常用溶液及其配制 | 第40页 |
| 1.1.4.1 细胞培养试剂 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-43页 |
| 1.2.1 腹水单抗的制备 | 第40页 |
| 1.2.2 单抗的效价测定 | 第40-41页 |
| 1.2.3 单抗亚类的鉴定 | 第41页 |
| 1.2.4 单抗的纯化及浓度测定 | 第41页 |
| 1.2.4.1 腹水纯化方法 | 第41页 |
| 1.2.5 单抗的生物学鉴定 | 第41-43页 |
| 1.2.5.1 杂交瘤细胞染色体计数 | 第41-42页 |
| 1.2.5.2 单抗相对亲和力常数测定 | 第42页 |
| 1.2.5.3 杂交瘤细胞株稳定性测定 | 第42-43页 |
| 1.2.6 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-46页 |
| 2.1 单抗的生物学鉴定 | 第43-46页 |
| 2.1.1 杂交瘤细胞的染色体数目 | 第43页 |
| 2.1.2 单抗相对亲和力常数 | 第43页 |
| 2.1.3 单抗效价测定 | 第43-44页 |
| 2.1.4 单抗亚类鉴定 | 第44页 |
| 2.1.5 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第44页 |
| 2.1.6 杂交瘤细胞株稳定性测定 | 第44-46页 |
| 3 结论与讨论 | 第46-47页 |
| 总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 英文摘要 | 第52-53页 |
