| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 猪带绦虫概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 猪带绦虫及猪带绦虫病 | 第12页 |
| 1.1.2 猪囊尾蚴病免疫学诊断及治疗研究 | 第12-13页 |
| 1.1.3 HIV与蠕虫共感染及潜在治疗药物 | 第13-14页 |
| 1.2 天冬氨酸蛋白酶概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 蛋白酶及其分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 DNA诱导损伤1样蛋白功能及结构 | 第15-16页 |
| 1.2.3 天冬氨酸蛋白酶抑制剂 | 第16-17页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 TSDDI1-LIKE基因的克隆及序列分析 | 第18-25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-20页 |
| 2.1.1 虫体 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 猪带绦虫成虫节片总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.1.5 cDNA合成 | 第19页 |
| 2.1.6 TsDdi1-like蛋白基因的扩增 | 第19页 |
| 2.1.7 TsDdi1-like蛋白基因的序列分析 | 第19-20页 |
| 2.2 结果 | 第20-23页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 TsDdi1-like基因 5' 和 3' 端序列扩增及序列分析 | 第20-21页 |
| 2.2.3 TsDdi1-like的序列分析 | 第21-23页 |
| 2.2.3.1 理化性质 | 第21页 |
| 2.2.3.2 二级结构分析 | 第21-22页 |
| 2.2.3.3 结构分析 | 第22页 |
| 2.2.3.43D结构预测 | 第22页 |
| 2.2.3.5 Ddi1-like蛋白的相似性分析 | 第22-23页 |
| 2.3 讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 TSDDI1-LIKE蛋白真核表达及酶活性测定 | 第25-31页 |
| 3.1 材料与方法 | 第25-27页 |
| 3.1.1 载体和菌株 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 3.1.4 构建重组质粒pPIC9K-TsDdi1-like | 第25页 |
| 3.1.5 重组质粒pPIC9K-TsDdi1-like线性化与感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 3.1.6 电转化与菌落筛选 | 第26页 |
| 3.1.7 重组菌株诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第26页 |
| 3.1.8 TsDdi1-like重组蛋白纯化及鉴定 | 第26页 |
| 3.1.9 rTsDdi1-like的Western-blot检测 | 第26-27页 |
| 3.1.10 rTsDdi1-like酶活力实验 | 第27页 |
| 3.2 结果 | 第27-29页 |
| 3.3.1 pPIC9K-TsDdi1-like重组质粒线性化 | 第27页 |
| 3.3.2 TsDdi1-like重组蛋白的诱导表达 | 第27-28页 |
| 3.3.3 TsDdi1-like重组蛋白纯化 | 第28页 |
| 3.3.4 rTsDdi1-like重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3.5 TsDdi1-like重组蛋白的酶活测定结果 | 第29页 |
| 3.3 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 TSDDI1-LIKE的组织定位 | 第31-37页 |
| 4.1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 4.1.1 实验动物、载体及菌株 | 第31页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 4.1.4 rTsDdi1-like多克隆抗体制备 | 第31页 |
| 4.1.5 免疫效价测定 | 第31-32页 |
| 4.1.6 抗体纯化 | 第32页 |
| 4.1.7 抗体特异性检测 | 第32页 |
| 4.1.8 组织定位 | 第32-33页 |
| 4.2 结果 | 第33-36页 |
| 4.2.1 TsDdi1-like重组蛋白的免疫血清效价测定 | 第33-34页 |
| 4.2.2 抗体特异性检测 | 第34页 |
| 4.2.3 TsDdi1-like在猪带绦虫成虫头节中的定位 | 第34-36页 |
| 4.3 结论 | 第36-37页 |
| 第五章 HIVPIS对TSDDI1-LIKE蛋白活力抑制效果 | 第37-44页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第37页 |
| 5.1.1 菌株与载体 | 第37页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 5.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 5.2.1 cDNA合成 | 第37页 |
| 5.2.2 TsDdi1-like基因扩增与点突变 | 第37-38页 |
| 5.2.3 酿酒酵母感受态细胞制备 | 第38页 |
| 5.2.4 电转化与阳性菌落筛选 | 第38页 |
| 5.2.5 重组酵母株体外培养及分泌蛋白测定 | 第38页 |
| 5.2.6 HIV蛋白酶抑制剂与重组酵母株共培养及分泌蛋白测定 | 第38-39页 |
| 5.2.7 多房棘球蚴体外药物抑制 | 第39页 |
| 5.2.7.1 原头节收集 | 第39页 |
| 5.2.7.2 原头节与药物共培养 | 第39页 |
| 5.2.7.3 原头节药物抑制效果评定 | 第39页 |
| 5.3 结果 | 第39-42页 |
| 5.3.1 TsDdi1-like基因扩增 | 第39-40页 |
| 5.3.2 重组酿酒酵母阳性菌落菌液PCR | 第40页 |
| 5.3.3 重组酵母株外源蛋白分泌 | 第40-41页 |
| 5.3.4 HIV蛋白酶抑制剂对重组酵母株蛋白分泌的影响 | 第41页 |
| 5.3.5 原头节药物抑制效果 | 第41-42页 |
| 5.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第六章 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51页 |
