| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 研究背景 | 第14-31页 |
| 1.1 血吸虫及血吸虫病研究概况 | 第14-20页 |
| 1.1.1 血吸虫的分类 | 第14页 |
| 1.1.2 血吸虫病的流行现状 | 第14-15页 |
| 1.1.3 血吸虫的生活史及发病机制 | 第15页 |
| 1.1.4 血吸虫病候选疫苗研究现状 | 第15-16页 |
| 1.1.5 血吸虫病治疗现状 | 第16-17页 |
| 1.1.6 抗日本血吸虫药物靶点研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2 氧化还原相关蛋白在血吸虫研究中的意义 | 第20-22页 |
| 1.3 蛋白功能、结构研究常用的技术方法 | 第22-28页 |
| 1.3.1 虫体蛋白功能研究 | 第23-25页 |
| 1.3.2 研究蛋白三级结构常用方法 | 第25-27页 |
| 1.3.3 同源模建和虚拟药物筛选 | 第27-28页 |
| 1.4 研究意义、前期基础和课题来源 | 第28-29页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第28页 |
| 1.4.2 前期基础 | 第28页 |
| 1.4.3 课题来源 | 第28-29页 |
| 1.5 总体研究方案 | 第29-31页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第31-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 培养基 | 第31页 |
| 2.1.2 载体、菌株和细胞 | 第31页 |
| 2.1.3 酶、引物和Marker | 第31页 |
| 2.1.4 分子克隆试剂盒 | 第31-32页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第32页 |
| 2.1.6 纯化介质和预装柱 | 第32页 |
| 2.1.7 酶活测定底物 | 第32页 |
| 2.1.8 血清 | 第32页 |
| 2.1.9 抗体 | 第32页 |
| 2.1.10 蛋白晶体条件筛选试剂盒 | 第32页 |
| 2.1.11 小分子化合物 | 第32页 |
| 2.1.12 日本血吸虫各虫期材料 | 第32页 |
| 2.1.13 动物 | 第32-33页 |
| 2.1.14 细胞毒性测定试剂盒 | 第33页 |
| 2.1.15 本研究常用溶液 | 第33页 |
| 2.1.16 其它 | 第33-34页 |
| 2.2 主要设备 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-49页 |
| 2.3.1 软件分析 | 第34页 |
| 2.3.2 分子克隆 | 第34-37页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导和表达 | 第37-38页 |
| 2.3.4 重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.5 蛋白免疫印记(Western blot)分析 | 第39页 |
| 2.3.6 蛋白分子量测定 | 第39-40页 |
| 2.3.7 重组蛋白酶活性测定方法 | 第40-41页 |
| 2.3.8 实时定量PCR | 第41页 |
| 2.3.9 兔多抗血清的制备 | 第41-42页 |
| 2.3.10 免疫荧光定位 | 第42页 |
| 2.3.11 蛋白结晶条件筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.12 衍射数据收集及晶体结构解析 | 第43页 |
| 2.3.13 化合物的虚拟筛选 | 第43页 |
| 2.3.14 BIAcore分析小分子和目标蛋白的结合 | 第43-44页 |
| 2.3.15 血吸虫的体外培养 | 第44页 |
| 2.3.16 化合物体外杀虫活性测试及半数致死剂量LD_(50)值的测定 | 第44-45页 |
| 2.3.17 杀虫活性化合物对重组蛋白活性抑制及半数抑制浓度(IC_(50))的测定 | 第45页 |
| 2.3.18 活性化合物细胞毒性测试 | 第45-46页 |
| 2.3.19 动物免疫保护实验 | 第46-49页 |
| 第3章 日本血吸虫醛糖还原酶功能、结构及应用研究 | 第49-80页 |
| 3.1 文献综述 | 第49-50页 |
| 3.1.1 简介 | 第49页 |
| 3.1.2 AR的结构 | 第49页 |
| 3.1.3 AR的活性及反应机制 | 第49页 |
| 3.1.4 AR的研究现状及其与血吸虫研究的关系 | 第49-50页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 3.2.1 序列及理化性质 | 第50页 |
| 3.2.2 二级结构及信号肽、跨膜区的预测 | 第50页 |
| 3.2.3 亚细胞定位和参与代谢途径 | 第50页 |
| 3.2.4 多序列联配分析和分子进化树的构建 | 第50-51页 |
| 3.3 SjAR的克隆、表达和纯化 | 第51-56页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组SjAR在大肠杆菌中的表达 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组SjAR的Western Blot鉴定 | 第53页 |
| 3.3.4 重组SjAR蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| 3.3.5 重组SjAR蛋白精确分子量的质谱测定 | 第55页 |
| 3.3.6 蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| 3.3.7 蛋白的保存 | 第55-56页 |
| 3.4 重组SjAR体外活性测定 | 第56-57页 |
| 3.5 重组SjAR结晶条件筛选、优化及结构解析 | 第57-62页 |
| 3.5.1 结晶条件筛选 | 第57-58页 |
| 3.5.2 结晶条件的优化 | 第58-60页 |
| 3.5.3 晶体衍射数据的收集及结构解析 | 第60-62页 |
| 3.6 基于SjAR结构的小分子抑制剂虚拟筛选 | 第62-65页 |
| 3.7 小分子化合物体外杀虫活性测试 | 第65-70页 |
| 3.7.1 初筛 | 第65-69页 |
| 3.7.2 化合物AR9的LD_(50)值测定 | 第69-70页 |
| 3.8 活性化合物对SjAR活性抑制研究 | 第70-72页 |
| 3.9 活性化合物AR9细胞毒性测试 | 第72-73页 |
| 3.10 兔多抗血清的制备及免疫原性分析 | 第73-74页 |
| 3.11 重组SjAR动物免疫保护研究 | 第74-75页 |
| 3.12 SjAR虫期转录水平差异分析 | 第75-76页 |
| 3.13 SjAR在成虫中的组织定位 | 第76-78页 |
| 3.14 总结讨论 | 第78-80页 |
| 第4章 日本血吸虫3-氧化酰基-酰基载体蛋白还原酶的功能及应用研究 | 第80-106页 |
| 4.1 文献综述 | 第80-81页 |
| 4.2 生物信息学分析 | 第81-82页 |
| 4.2.1 序列及理化性质 | 第81页 |
| 4.2.2 二级结构及信号肽、跨膜区的预测 | 第81-82页 |
| 4.2.3 亚细胞定位和参与代谢途径 | 第82页 |
| 4.2.4 多序列联配分析 | 第82页 |
| 4.3 SjOAR的克隆、表达和纯化 | 第82-87页 |
| 4.3.1 重组质粒的验证 | 第82-83页 |
| 4.3.2 重组SjOAR的表达 | 第83页 |
| 4.3.3 重组SjOAR表达的Western Blot鉴定 | 第83-84页 |
| 4.3.4 重组SjOAR蛋白的纯化 | 第84-86页 |
| 4.3.5 重组SjOAR蛋白精确分子量的质谱测定 | 第86页 |
| 4.3.6 蛋白浓度的测定 | 第86页 |
| 4.3.7 蛋白的保存 | 第86-87页 |
| 4.4 重组SjOAR活性分析及表观米氏常数测定 | 第87-88页 |
| 4.4.1 重组SjOAR活性的测定 | 第87页 |
| 4.4.2 重组SjOAR动力学分析及米氏常数的测定 | 第87-88页 |
| 4.5 SjOAR同源模建及小分子抑制剂的虚拟筛选 | 第88-90页 |
| 4.5.1 SjOAR同源模建 | 第88-89页 |
| 4.5.2 分子对接打分 | 第89-90页 |
| 4.6 BIAcore评估选定小分子与SjOAR的结合能力 | 第90-92页 |
| 4.6.1 重组SjOAR蛋白与NTA芯片的偶联固化 | 第90-91页 |
| 4.6.2 小分子化合物与SjOAR结合能力评价 | 第91页 |
| 4.6.3 结合动力学曲线和动力学参数 | 第91-92页 |
| 4.7 小分子化合物体外杀虫活性测试 | 第92-99页 |
| 4.7.1 初筛 | 第92-95页 |
| 4.7.2 活性化合物LD_(50)值的测定 | 第95-99页 |
| 4.8 活性化合物对SjOAR酶活性的抑制研究 | 第99页 |
| 4.9 活性化合物细胞毒性测试 | 第99-100页 |
| 4.10 重组SjOAR兔多抗血清的制备及免疫原性分析 | 第100-101页 |
| 4.11 重组SjOAR动物免疫保护研究 | 第101-102页 |
| 4.12 SjOAR虫期转录水平差异分析 | 第102页 |
| 4.13 SjOAR在成虫中的组织定位 | 第102-103页 |
| 4.14 总结讨论 | 第103-106页 |
| 第5章 日本血吸虫硫氧还蛋白-1的定性及以其为靶点的杀虫活性研究 | 第106-117页 |
| 5.1 文献综述 | 第106-107页 |
| 5.2 生物信息学分析 | 第107-109页 |
| 5.2.1 序列及理化性质 | 第107-108页 |
| 5.2.2 二级结构及信号肽、跨膜区的预测 | 第108页 |
| 5.2.3 亚细胞定位和参与代谢途径 | 第108页 |
| 5.2.4 多序列联配分析和分子进化树的构建 | 第108-109页 |
| 5.3 SjTrx-1的克隆、表达和纯化 | 第109-110页 |
| 5.3.1 重组质粒的鉴定 | 第109页 |
| 5.3.2 SjTrx-1的表达和纯化 | 第109-110页 |
| 5.4 重组SjTrx-1酶活性测定 | 第110-111页 |
| 5.5 SjTrx-1金诺芬作用的另一个靶点吗? | 第111页 |
| 5.6 金诺芬对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果相同吗? | 第111-112页 |
| 5.7 金诺芬和吡喹酮作用后虫体形态上表现出相似性? | 第112-113页 |
| 5.8 金诺芬细胞毒性测试 | 第113页 |
| 5.9 SjTrx-1虫期转录特异性研究 | 第113-114页 |
| 5.10 SjTrx-1在成虫中的组织定位 | 第114-115页 |
| 5.11 总结讨论 | 第115-117页 |
| 第6章 结论和展望 | 第117-121页 |
| 6.1 结论 | 第117-118页 |
| 6.2 创新点 | 第118页 |
| 6.3 展望 | 第118-121页 |
| 参考文献 | 第121-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文和专利 | 第131页 |
