| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 研究背景及文献综述 | 第15-33页 |
| 一 血细胞发生 | 第15-21页 |
| 1 胚胎发育过程中血细胞的发生 | 第15-16页 |
| 2 原始红细胞(primitive erythroid cells)与永久红细胞(definitive erythroid cells)的异同 | 第16-18页 |
| 3 红细胞脱核过程 | 第18-19页 |
| 4 红细胞成熟过程中主要的细胞表面标志 | 第19-21页 |
| 二 早期血发生的体外研究模型—拟胚体 | 第21-23页 |
| 三 巨核细胞发生 | 第23-25页 |
| 四 MicroRNAs在红细胞与巨核细胞发育过程中的作用 | 第25-29页 |
| 五 MicroRNA靶基因的研究方法 | 第29-30页 |
| 六 基因介绍 | 第30-33页 |
| 第二章 在拟胚体中CD71+~(high)细胞代表原始红细胞 | 第33-71页 |
| 一 引言 | 第33-36页 |
| 二 实验材料与实验方法 | 第36-55页 |
| 1 主要试剂和仪器 | 第36-41页 |
| 1.1 试剂与试剂盒 | 第36-37页 |
| 1.2 主要实验仪器及器材 | 第37页 |
| 1.3 实验耗材 | 第37-38页 |
| 1.4 主要试剂配方 | 第38-41页 |
| 2 细胞和细胞培养基配制 | 第41-43页 |
| 2.1 细胞 | 第41页 |
| 2.2 细胞培养基配制 | 第41-43页 |
| 3 抗体 | 第43页 |
| 4 引物序列 | 第43-45页 |
| 5 试验方法 | 第45-55页 |
| 5.1 细胞培养 | 第45-47页 |
| 5.2 流式分析与分选 | 第47-48页 |
| 5.3 甲基纤维素集落形成实验 | 第48-49页 |
| 5.4 ChIP实验 | 第49-50页 |
| 5.5 RNA抽提及PCR检测 | 第50-52页 |
| 5.6 shRNA构建 | 第52-54页 |
| 5.7 磷酸钙转染(病毒包装) | 第54-55页 |
| 三 结果与分析 | 第55-69页 |
| 1 在EB发育过程中,CD71+~(high)细胞群体出现 | 第55-57页 |
| 2 转录因子SCL与CD71+~(high)群体直接相关 | 第57-59页 |
| 3 CD71+~(high)富集了红细胞 | 第59-60页 |
| 4 CD71+~(high)细胞包含的是原始红细胞而不是永久红细胞 | 第60-63页 |
| 5 EB中CD71-&CD71+~(low)与CD71+~(high)细胞的发育潜能 | 第63-65页 |
| 6 EB中CD71+~(high)细胞在体外培养时能继续分化,血红蛋白表达升高,并且不同血红蛋白链的绝对量组成发生改变 | 第65-67页 |
| 7 拟胚体中CD71+~(high)细胞在体外培养时成悬浮状态 | 第67-69页 |
| 四 结语 | 第69-71页 |
| 第三章 MiR-451在血发生中的功能及调控研究 | 第71-103页 |
| 一 引言 | 第71-73页 |
| 二 实验材料与实验方法 | 第73-86页 |
| 1 主要试剂和仪器 | 第73-77页 |
| 1.1 试剂与试剂盒 | 第73-74页 |
| 1.2 主要实验仪器及器材 | 第74-75页 |
| 1.3 实验耗材 | 第75页 |
| 1.4 主要试剂配方 | 第75-77页 |
| 2 细胞和细胞培养基配制 | 第77-79页 |
| 2.1 细胞 | 第77页 |
| 2.2 细胞培养基配制 | 第77-79页 |
| 3 抗体 | 第79页 |
| 4 引物序列 | 第79-81页 |
| 5 实验方法 | 第81-86页 |
| 5.1 流式分选 | 第81-82页 |
| 5.2 成熟microRNA序列检测 | 第82-83页 |
| 5.3 MicroRNA mimics转染 | 第83-84页 |
| 5.4 蛋白印迹(WB) | 第84-85页 |
| 5.5 其他实验方法 | 第85-86页 |
| 三 结果与分析 | 第86-102页 |
| 1 MiR-451在胚胎血及成体血中的表达 | 第86-89页 |
| 2 SCL调节miR144/451的表达 | 第89-91页 |
| 3. MiR-451的功能 | 第91-94页 |
| 4 MiR-451的新靶基因CAP1 | 第94-99页 |
| 5 CAP1的功能研究 | 第99-102页 |
| 四 结语 | 第102-103页 |
| 第四章 FLI-1、ERG、ETS-1与GATA-1对趋化因子CCL5、PBP的表达调节 | 第103-128页 |
| 一 引言 | 第103-105页 |
| 二 实验材料与实验方法 | 第105-114页 |
| 1 主要试剂和仪器 | 第105-107页 |
| 1.1 试剂与试剂盒 | 第105-106页 |
| 1.2 主要实验仪器及器材 | 第106页 |
| 1.3 实验耗材 | 第106页 |
| 1.4 主要试剂配方 | 第106-107页 |
| 2 细胞和细胞培养基配制 | 第107-108页 |
| 2.1 细胞 | 第107页 |
| 2.2 细胞培养基配制 | 第107-108页 |
| 3 抗体 | 第108页 |
| 4 引物序列 | 第108-110页 |
| 5 试验方法 | 第110-114页 |
| 5.1 RNA抽提及PCR检测 | 第110页 |
| 5.2 流式分析 | 第110页 |
| 5.3 过表达质粒以及启动子报告基因质粒的构建 | 第110-112页 |
| 5.4 CCL5报告基因突变体的构建 | 第112页 |
| 5.5 磷酸钙转染(病毒包装) | 第112页 |
| 5.6 双荧光素报告实验 | 第112-114页 |
| 三 结果与讨论 | 第114-126页 |
| 1 FLI-1、ERG、ETS-1与GATA-1共同调节趋化因子CCL5表达 | 第114-123页 |
| 1.1 PMA诱导K562细胞向巨核细胞发育的过程中,内源性的CCL5与FLI-1表达上调 | 第114-115页 |
| 1.2 在K562中过表达FLI-1,能诱导K562向巨核细胞分化,同时上调内源性的CCL5的表达 | 第115-117页 |
| 1.3 FLI-1通过激活CCL5的启动子上调CCL5的表达 | 第117页 |
| 1.4 GATA-1能激活CCL5的启动子 | 第117页 |
| 1.5 FLI-1与GATA-1对CCL5启动子的激活作用是叠加的 | 第117-119页 |
| 1.6 FLI-1通过结合-217位与-132位ETS位点调节CCL5启动子表达,GATA-1通过结合-82位GATA位点调节CCL5启动子表达 | 第119-121页 |
| 1.7 ETS-1与ERG激活CCL5启动子表达 | 第121-123页 |
| 2. FLI-1、ERG、ETS-1与GATA-1对趋化因子PBP表达的调节 | 第123-124页 |
| 3 ERG调节FLI-1表达 | 第124-126页 |
| 四 结语 | 第126-128页 |
| 第五章 转录因子对红细胞及巨核细胞谱系平衡的调控 | 第128-142页 |
| 一 引言 | 第128-130页 |
| 二 实验材料与实验方法 | 第130-133页 |
| 1 主要试剂和仪器 | 第130页 |
| 2 细胞和细胞培养基配制 | 第130页 |
| 3 引物序列 | 第130-131页 |
| 4 实验方法 | 第131-133页 |
| 4.1 联苯胺染色 | 第131页 |
| 4.2 细胞周期检测 | 第131-132页 |
| 4.3 其他实验方法 | 第132-133页 |
| 三 结果与讨论 | 第133-141页 |
| 1 红系特异基因KLF1促进红细胞发育抑制巨核细胞发育 | 第133-136页 |
| 2 巨核细胞特异基因抑制红细胞发育 | 第136-138页 |
| 3 MiR-142抑制红细胞发育促进巨核细胞发育 | 第138-141页 |
| 四 结语 | 第141-142页 |
| 第六章 全文总结 | 第142-145页 |
| 一 全文总结 | 第142-143页 |
| 二 全文讨论 | 第143-145页 |
| 附录 缩略词表 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-157页 |
| 致谢 | 第157页 |
