| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| 1.1 根结线虫简介 | 第9-10页 |
| 1.1.1 根结线虫致病机理 | 第9-10页 |
| 1.1.2 根结线虫防治研究 | 第10页 |
| 1.2 象耳豆根结线虫研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 象耳豆根结线虫的发生与分布 | 第10-11页 |
| 1.2.2 象耳豆根结线虫的生活史 | 第11页 |
| 1.2.3 象耳豆根结线虫分类地位及形态特征 | 第11-12页 |
| 1.3 植物寄生线虫促分裂原活化蛋白激酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.1 促分裂原活化蛋白激酶基因简介 | 第12页 |
| 1.3.2 植物寄生线虫促分裂原活化蛋白激酶基因的结构及编码蛋白特点 | 第12页 |
| 1.3.3 MAPK通路研究展望 | 第12-13页 |
| 1.4 植物寄生线虫纤维素结合蛋白研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4.1 纤维素结合蛋白基因简介 | 第13页 |
| 1.4.2 植物寄生线虫纤维素结合蛋白基因的结构及编码蛋白特点 | 第13-14页 |
| 1.4.3 植物寄生线虫纤维素结合蛋白基因表达分析 | 第14页 |
| 1.5 植物寄生线虫RNAi研究进展 | 第14-15页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第15页 |
| 1.7 研究的技术路线 | 第15-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-36页 |
| 2.1 供试线虫 | 第17页 |
| 2.2 主要耗材与仪器 | 第17页 |
| 2.3 主要配制试剂 | 第17-19页 |
| 2.4 Me-mapk-1 cDNA第一链合成 | 第19-20页 |
| 2.4.1 象耳豆根结线虫J2总RNA提取 | 第19页 |
| 2.4.2 cDNA第一链合成 | 第19-20页 |
| 2.5 RACE获Me-mapk-1的全长 | 第20-25页 |
| 2.5.1 mapk引物设计与合成 | 第20页 |
| 2.5.2 RACE模板的获得 | 第20-22页 |
| 2.5.3 MAPK基因cDNA 3'末端扩增 | 第22-23页 |
| 2.5.4 产物的回收 | 第23页 |
| 2.5.5 连接至T载体及转化 | 第23-24页 |
| 2.5.6 MAPK基因cDNA 5'末端扩增 | 第24-25页 |
| 2.5.7 MAPK全长序列的克隆 | 第25页 |
| 2.6 象耳豆根结线虫MAPK基因的原核表达 | 第25-28页 |
| 2.6.1 目的基因片段扩增 | 第25-26页 |
| 2.6.2 提取和鉴定质粒DNA | 第26页 |
| 2.6.3 表达重组子pET-32a-mapk的建立 | 第26-27页 |
| 2.6.4 连接产物的转化以及筛选阳性克隆 | 第27页 |
| 2.6.5 提取pET-32a-MAPK质粒转入大肠杆菌BL21 | 第27页 |
| 2.6.6 Me-MAPK的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.6.7 表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第28页 |
| 2.7 象耳豆根结线虫MAPK基因的RNAi分析 | 第28-31页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.7.2 线虫总RNA提取和cDNA获得 | 第29页 |
| 2.7.3 Me-mapk-1特异靶标序列的获得 | 第29页 |
| 2.7.4 dsRNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.7.5 Me-mapk-1的RNAi分析 | 第30-31页 |
| 2.7.6 侵染力分析 | 第31页 |
| 2.8 RACE获Me-cbp-1基因的全长的克隆 | 第31-32页 |
| 2.8.1 引物设计 | 第31-32页 |
| 2.8.2 Me-cbp-1基因3'和5末端的扩增 | 第32页 |
| 2.8.3 Me-cbp-1 cDNA全长扩增 | 第32页 |
| 2.9 Me-CBP-1的原位杂交 | 第32-34页 |
| 2.9.1 标记探针 | 第32-33页 |
| 2.9.2 杂交前处理 | 第33页 |
| 2.9.3 预杂交和杂交 | 第33页 |
| 2.9.4 显色观察 | 第33-34页 |
| 2.10 象耳豆根结线虫cbp基因的RNAi分析 | 第34-36页 |
| 2.10.1 引物设计 | 第34页 |
| 2.10.2 线虫总RNA提取和cDNA的获得 | 第34页 |
| 2.10.3 Me-cbp-1特异靶标序列获得 | 第34-35页 |
| 2.10.4 dsRNA的合成 | 第35页 |
| 2.10.5 Me-cbp-1的RNAi分析 | 第35页 |
| 2.10.6 侵染力分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-46页 |
| 3.1 总RNA提取 | 第36页 |
| 3.2 Me-mapk-1基因3'和5'末端的克隆 | 第36-38页 |
| 3.3 ME-MAPK-1蛋白序列特征及结构与功能预测 | 第38-39页 |
| 3.4 ME-MAPK1重组蛋白诱导表达 | 第39页 |
| 3.5 Me-mapk-1 RNAi效应分析 | 第39-40页 |
| 3.6 Me-mapk-1 RNAi效应表型分析 | 第40-41页 |
| 3.7 Me-cbp-1 cDNA序列 | 第41-42页 |
| 3.8 Me-CBP-1蛋白序列特征与结构功能预测 | 第42-43页 |
| 3.9 Me-cbp-1组织表达定位 | 第43-44页 |
| 3.10 Me-cbp-1 dsRNA沉默 | 第44-45页 |
| 3.11 Me-cbp-1 RNAi效应分析 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 M. enterolobii的mapk基因 | 第46页 |
| 4.2 M. enterolobii的cbp基因 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 缩略表 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
