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玉米小斑病菌中Vel2与Vos1的功能分析

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
英文缩写第8-12页
第1章 引言第12-28页
    1.1 玉米小斑病的危害第12-13页
    1.2 玉米小斑病菌简介第13-14页
    1.3 T-毒素第14-15页
    1.4 丝状子囊真菌的生长发育第15-20页
        1.4.1 丝状子囊真菌的无性生殖第17-18页
        1.4.2 丝状子囊真菌的有性生殖第18-20页
    1.5 真菌的主要次生代谢产物第20-22页
    1.6 Velvet 基因家族研究进展第22-27页
        1.6.1 Velvet 结构域第22-23页
        1.6.2 Velvet 家族成员的功能第23-27页
    1.7 本研究的目的与意义第27-28页
第2章 Vel2 和 Vos1 缺失突变体的构建第28-57页
    2.1 实验材料第28-31页
        2.1.1 菌株第28页
        2.1.2 质粒第28页
        2.1.3 引物第28-29页
        2.1.4 试剂第29-30页
        2.1.5 培养基及相关溶液第30页
        2.1.6 实验仪器第30-31页
    2.2 实验方法第31-45页
        2.2.1 基因组 DNA 的提取第31-32页
        2.2.2 PCR 产物的切胶纯化第32-33页
        2.2.3 质粒的提取第33页
        2.2.4 原生质体的制备、转化及再生第33-35页
        2.2.5 单孢分离第35页
        2.2.6 Vel2 和 Vos1 缺失突变体的构建第35-37页
        2.2.7 Vel2 和 Vos1 缺失突变体的回补第37-39页
        2.2.8 Vel2 和 Vos1 的过量表达第39-41页
        2.2.9 Vel2 和 Vos1 双突变体的构建第41-43页
        2.2.10 真菌总 RNA 的提取第43页
        2.2.11 DNase 消化总 RNA第43-44页
        2.2.12 cDNA 第一条链的合成第44-45页
        2.2.13 荧光定量 PCR第45页
    2.3 结果分析第45-55页
        2.3.1 Vel2 和 Vos1 序列的鉴定第45-46页
        2.3.2 Vel2 和 Vos1 缺失突变体的构建以及验证第46-48页
        2.3.3 vel2 和 vos1 回补菌株的构建以及验证第48-51页
        2.3.4 Vel2 和 Vos1 过表达菌株的构建以及验证第51-54页
        2.3.5 Vel2 和 Vos1 双敲除突变体的构建以及验证第54-55页
    2.4 讨论第55-57页
第3章 Vel2 和 Vos1 对生殖生长的影响第57-83页
    3.1 实验材料第57-59页
        3.1.1 菌株第57页
        3.1.2 引物第57-58页
        3.1.3 试剂第58-59页
        3.1.4 培养基及相关溶液第59页
        3.1.5 主要仪器第59页
    3.2 实验方法第59-63页
        3.2.1 玉米小斑病菌在无性生殖过程中分生孢子产量的测定第59-60页
        3.2.2 分生孢子活性的测定第60页
        3.2.3 分生孢子对过氧化物的抗性以及温度敏感性的测定第60页
        3.2.4 CAT3 表达分析第60-61页
        3.2.5 海藻糖含量的测定以及海藻糖合成和降解相关基因的表达分析第61-62页
        3.2.6 玉米小斑病菌有性生殖的诱导第62页
        3.2.7 子囊壳、子囊、子囊孢子数量的测定以及子囊孢子的分离第62-63页
        3.2.8 玉米小斑病菌有性生殖过程中无性孢子的产量的测定第63页
    3.3 结果分析第63-80页
        3.3.1 Vel2 和 Vos1 对无性生殖的影响第63-71页
        3.3.2 Vel2 和 Vos1 对有性生殖的影响第71-79页
        3.3.3 VEL2 是 VOS1 的上位,VOS1 是 VEL2 的下位第79-80页
    3.4 讨论第80-83页
        3.4.1 Vel2 和 Vos1 对无性生殖的影响第80-81页
        3.4.2 Vel2 和 Vos1 对有性生殖的影响第81-83页
第4章 Vel2 和 Vos1 对次生代谢以及致病力的影响第83-97页
    4.1 实验材料第83-86页
        4.1.1 菌株第83页
        4.1.2 玉米品种第83-84页
        4.1.3 引物第84页
        4.1.4 主要试剂第84-85页
        4.1.5 主要仪器第85页
        4.1.6 主要培养基和溶液第85-86页
    4.2 实验方法第86-89页
        4.2.1 玉米小斑病菌黑色素合成能力的对比第86页
        4.2.2 T 毒素合成能力的比较第86-87页
        4.2.3 T 毒素合成相关基因的表达分析第87-88页
        4.2.4 玉米小斑病菌对玉米叶片致病力的检测第88-89页
    4.3 结果分析第89-94页
        4.3.1 Vel2 和 Vos1 对次生代谢的影响第89-93页
        4.3.2 Vel2 和 Vos1 对玉米小斑病菌致病力的影响第93-94页
    4.4 讨论第94-97页
        4.4.1 Vel2 和 Vos1 与次生代谢的关系第94-95页
        4.4.2 Vel2 和 Vos1 与致病力的关系第95-97页
第5章 结论第97-99页
参考文献第99-112页
附录第112-117页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第117-118页
致谢第118页

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