| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 芽孢杆菌概述 | 第10-11页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌在医药方面的应用 | 第11页 |
| 1.2.2 枯草芽孢杆菌在农业方面的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌在生物农药方面的应用 | 第12页 |
| 1.2.4 枯草芽孢杆菌在现代科学研究领域的应用 | 第12页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌发酵菌株的优缺点 | 第12-13页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌分泌系统的概述 | 第13-15页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌糖类转运机制 | 第15-16页 |
| 1.6 枯草芽孢杆菌穿梭载体概述 | 第16-18页 |
| 1.6.1 穿梭载体概述 | 第16页 |
| 1.6.2 穿梭载体的构建理论概述 | 第16-18页 |
| 1.7 立题依据和研究内容 | 第18-20页 |
| 1.8 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-36页 |
| 2.1 材料 | 第21-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第21页 |
| 2.1.4 重组载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.1.6 PCR扩增及酶切连接体系 | 第23-24页 |
| 2.1.7 目的片段的回收纯化验证 | 第24-25页 |
| 2.1.8 目的片段的连接验证 | 第25-26页 |
| 2.1.9 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.1.10 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第26-28页 |
| 2.1.11 淀粉酶活力的测定方法 | 第28页 |
| 2.1.12 总DNA的提取方法 | 第28-29页 |
| 2.2 高效转化枯草芽孢杆菌试验配方 | 第29-31页 |
| 2.2.1 转化用培养基 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 电击法转化法用培养基 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 spizizen低盐环境下培养基配方 | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 低盐环境形成饥饿感受态在其它菌株中的改良方法配方(称C法) | 第31页 |
| 2.2.1.4 原生质体转化用配方 | 第31页 |
| 2.2.1.5 电击法诱导的原生质体转化配方 | 第31页 |
| 2.3 感受态制备及转化方法 | 第31-33页 |
| 2.4 枯草芽孢杆菌麦芽糖表达载体的构建及其特性研究 | 第33-36页 |
| 2.4.1 引物扩增测序鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4.2 麦芽糖诱导型表达载体构建及分子改造 | 第34-35页 |
| 2.4.3 报告基因实验设计 | 第35页 |
| 2.4.4 发酵条件优化实验设计 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-54页 |
| 3.1 高效转化枯草芽孢杆菌的试验结果分析 | 第36-41页 |
| 3.1.1 Cm抗性最适添加物浓度的确定 | 第36-37页 |
| 3.1.2 电转化实验条件的确定 | 第37-38页 |
| 3.1.3 S法转化实验条件的确定 | 第38-40页 |
| 3.1.4 C法转化实验条件的确定 | 第40页 |
| 3.1.5 转化实验小结 | 第40-41页 |
| 3.2 枯草芽孢杆菌麦芽糖表达载体的构建及其特性研究 | 第41-54页 |
| 3.2.1 地衣芽孢杆菌高温淀粉酶基因的序列研究 | 第41-42页 |
| 3.2.2 灰色链霉菌淀粉酶基因序列研究 | 第42-43页 |
| 3.2.3 基因产物琼脂糖凝胶验证 | 第43-47页 |
| 3.2.4 荧光蛋白表达结果与分析 | 第47-48页 |
| 3.2.5 高温淀粉酶基因表达结果与分析 | 第48-49页 |
| 3.2.6 灰色链霉菌淀粉酶基因表达结果与分析 | 第49-50页 |
| 3.2.7 GW-amy(sign)在枯草芽孢杆菌中表达条件的优化 | 第50-52页 |
| 3.2.7.1 最适麦芽糖添加量的测定 | 第50页 |
| 3.2.7.2 最适诱导温度的测定 | 第50-51页 |
| 3.2.7.3 最适诱导物添加时间测定 | 第51页 |
| 3.2.7.4 最适接种量及酶活曲线的测定 | 第51-52页 |
| 3.2.8 分子改造麦芽糖诱导型表达载体后酶活曲线测定 | 第52-53页 |
| 3.2.9 发酵条件优化小结 | 第53-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 高效转化枯草芽孢杆菌IA857方法的研究 | 第54-55页 |
| 4.2 麦芽糖诱导型高效表达载体的构建及其特性研究 | 第55-56页 |
| 4.3 麦芽糖诱导型表达载体的改造 | 第56-58页 |
| 第五章 结论和展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58-59页 |
| 5.1.1 枯草芽孢杆菌高效转化方法研究 | 第58页 |
| 5.1.2 枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型高效表达载体构建及其特性研究、发酵条件优化 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录1 | 第65-68页 |
| 一、主要培养基的配制 | 第65页 |
| 二、主要实验仪器和设备 | 第65-66页 |
| 三、常用溶液和缓冲液的配制 | 第66-68页 |
| 附录2 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第73页 |
