| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 英文缩略词 | 第7-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 中华鳖的生物学特征及疾病概况 | 第11-14页 |
| 1.1.1 中华鳖的生物学特征 | 第11-12页 |
| 1.1.2 中华鳖疾病的概况 | 第12-14页 |
| 1.2 嗜水气单胞菌的分类 | 第14页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌的致病性 | 第14-16页 |
| 1.3.1 流行性 | 第14页 |
| 1.3.2 毒力因子 | 第14-16页 |
| 1.4 外膜蛋白及其基因 | 第16-18页 |
| 1.4.1 OmpA蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4.2 微孔蛋白 | 第17页 |
| 1.4.3 脂蛋白 | 第17-18页 |
| 1.4.4 外膜蛋白的免疫原性 | 第18页 |
| 1.5 对嗜水气单胞菌的免疫预防 | 第18-19页 |
| 1.6 总结 | 第19-20页 |
| 第2章 鳖源致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定及毒力因子检测 | 第20-30页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 材料来源 | 第20页 |
| 2.1.2 试验用中华鳖 | 第20页 |
| 2.1.3 工具酶及试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 常用缓冲液及试剂配制 | 第21页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 细菌的分离 | 第21页 |
| 2.2.2 细菌形态特征观察和理化特性检查 | 第21页 |
| 2.2.3 细菌的分子鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.4 分离菌对中华鳖的致病力试验 | 第22-23页 |
| 2.2.5 部分毒力基因检测 | 第23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-28页 |
| 2.3.1 病原菌菌落和形态观察 | 第23-25页 |
| 2.3.2 病原菌生理生化特征 | 第25页 |
| 2.3.3 16S rRNA基因序列同源性分析 | 第25-26页 |
| 2.3.4 人工试验结果 | 第26-27页 |
| 2.3.5 Aer、hly基因检测结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 嗜水气单胞菌主要外膜蛋白的克隆及其表达载体的构建 | 第30-40页 |
| 3.1 材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 菌种及载体 | 第30页 |
| 3.1.2 工具酶及试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.3 常用缓冲液及试剂配制 | 第31页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第31页 |
| 3.2 方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第31页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR | 第31-32页 |
| 3.2.3 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 3.2.4 感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 3.2.5 质粒提取 | 第32-33页 |
| 3.2.6 酶切与纯化 | 第33页 |
| 3.2.7 连接与转化 | 第33-34页 |
| 3.2.8 嗜水气单胞菌主要外膜蛋白基因在大肠杆菌中表达 | 第34-35页 |
| 3.2.9 重组蛋白的免疫印迹 | 第35页 |
| 3.2.10 包涵体的纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.11 SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 外膜蛋白基因的克隆与载体构建 | 第36-37页 |
| 3.3.2 重组外膜蛋白的诱导表达与纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重组外膜蛋白的免疫印迹 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第4章 嗜水气单胞菌四种外膜蛋白对中华鳖的免疫原性 | 第40-47页 |
| 4.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.1 实验用中华鳖 | 第40页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 4.2 方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 取血与攻毒实验 | 第40-41页 |
| 4.2.2 ELISA检测特异性抗体效价 | 第41页 |
| 4.2.3 免疫印迹 | 第41-42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-45页 |
| 4.3.1 抗体效价的检测 | 第42-43页 |
| 4.3.2 人工攻击实验与相对免疫保护率 | 第43-44页 |
| 4.3.3 免疫后中华鳖血清对重组外膜蛋白的识别 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第5章 展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录A | 第55-59页 |
| 附录B | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第61页 |
