| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第15-29页 |
| 1.1 研究的目的和意义 | 第15页 |
| 1.2 国内外相关文献综述 | 第15-28页 |
| 1.2.1 病毒感染与呼吸道的天然免疫机制 | 第15-17页 |
| 1.2.2 呼吸道上皮细胞的分离培养 | 第17-18页 |
| 1.2.3 模式识别受体介导的天然免疫抗病毒机制 | 第18-21页 |
| 1.2.4 miRNAs对天然免疫调节的初步研究 | 第21-22页 |
| 1.2.5 miRNAs对抗病毒细胞因子的调控 | 第22-24页 |
| 1.2.6 RNA病毒对天然免疫的逃避机制 | 第24-25页 |
| 1.2.7 miR-20a在细胞增殖和免疫调控中的作用 | 第25-26页 |
| 1.2.8 细胞自噬与抗病毒天然免疫 | 第26-28页 |
| 1.3 课题来源及主要研究内容 | 第28-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-51页 |
| 2.1 材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第29页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第29页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2.1.5 主要生物学软件及生物信息网址 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-51页 |
| 2.2.1 猪呼吸道上皮细胞原代培养及纯化鉴定 | 第32-34页 |
| 2.2.2 测序样本处理及总RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.2.3 测序数据初步分析 | 第35-36页 |
| 2.2.4 miRNAs过表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 2.2.5 双荧光素酶报告基因质粒构建 | 第39-42页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因分析 | 第42-44页 |
| 2.2.7 Stem-loop RT-PCR | 第44-46页 |
| 2.2.8 miR-20a过表达体系建立 | 第46-47页 |
| 2.2.9 细胞增殖检测 | 第47-48页 |
| 2.2.10 细胞迁移检测 | 第48页 |
| 2.2.11 细胞炎症因子Real-time PCR检测 | 第48-49页 |
| 2.2.12 细胞自噬检测 | 第49-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-92页 |
| 3.1 呼吸道上皮细胞的原代分离鉴定 | 第51-52页 |
| 3.1.1 呼吸道上皮细胞的原代培养与纯化 | 第51页 |
| 3.1.2 呼吸道上皮细胞免疫荧光鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2 小RNA的Hiseq高通量测序分析 | 第52-65页 |
| 3.2.1 数据处理及长度分布 | 第52-53页 |
| 3.2.2 基因组比对 | 第53页 |
| 3.2.3 已知miRNAs的比对 | 第53-54页 |
| 3.2.4 小RNA分类注释 | 第54-55页 |
| 3.2.5 miRNAs表达分析 | 第55-57页 |
| 3.2.6 miRNAs聚类分析 | 第57-61页 |
| 3.2.7 新miRNAs鉴定 | 第61-65页 |
| 3.3 差异表达miRNAs的功能分析 | 第65-76页 |
| 3.3.1 生物信息学预测靶基因 | 第65页 |
| 3.3.2 差异表达miRNAs通路分析 | 第65-66页 |
| 3.3.3 miR-101靶基因实验验证 | 第66-69页 |
| 3.3.4 miR-20a靶基因实验验证 | 第69-76页 |
| 3.4 miRNAs编辑及功能鉴定 | 第76-82页 |
| 3.4.1 miRNAs的碱基编辑分析 | 第76-80页 |
| 3.4.2 miRNAs Position 5编辑对靶基因识别的影响 | 第80-82页 |
| 3.5 诱导表达分析 | 第82-83页 |
| 3.6 组织表达分析 | 第83-84页 |
| 3.7 miR-20a的功能分析 | 第84-92页 |
| 3.7.1 不同浓度模拟物对转染效果的影响 | 第84-85页 |
| 3.7.2 Q-PCR检测模拟物和抑制剂的过表达效果 | 第85页 |
| 3.7.3 模拟物稳定性的评价 | 第85-86页 |
| 3.7.4 miR-20a对细胞增殖的影响 | 第86-87页 |
| 3.7.5 miR-20a对细胞迁移的影响 | 第87-89页 |
| 3.7.6 miR-20a对细胞炎症因子表达的影响 | 第89-90页 |
| 3.7.7 miR-20a对细胞自噬的影响 | 第90-92页 |
| 4 讨论 | 第92-99页 |
| 4.1 猪呼吸道上皮细胞的原代培养 | 第92页 |
| 4.2 miRNAs的差异表达分析 | 第92-93页 |
| 4.3 miRNAs的碱基编辑 | 第93-94页 |
| 4.4 新miRNA的分析鉴定 | 第94页 |
| 4.5 miRNAs过表达效果的评价 | 第94-95页 |
| 4.6 miRNAs与抗病毒细胞因子在天然免疫调控中的作用 | 第95页 |
| 4.7 细胞自噬与天然免疫的调控关系 | 第95-96页 |
| 4.8 部分候选靶基因的功能分析 | 第96-99页 |
| 5 结论 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-112页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第112页 |
