| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 甘露聚糖 | 第13-14页 |
| 1.1.1 甘露聚糖的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 甘露聚糖的应用 | 第14页 |
| 1.2 β-甘露聚糖酶 | 第14-19页 |
| 1.2.1 β-甘露聚糖酶的来源 | 第14-15页 |
| 1.2.2 β-甘露聚糖酶基因的性质 | 第15-16页 |
| 1.2.3 β-甘露聚糖酶的应用 | 第16-19页 |
| 1.3 植物内生细菌 | 第19-21页 |
| 1.3.1 植物内生细菌的来源 | 第19页 |
| 1.3.2 植物内生细菌的多样性 | 第19-20页 |
| 1.3.3 植物内生细菌的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 本课题的研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 内生细菌的分离、筛选及鉴定 | 第23-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1.1 材料 | 第23-27页 |
| 2.1.2 植物表面消毒方法 | 第27页 |
| 2.1.3 产 β-甘露聚糖酶菌株的初筛 | 第27页 |
| 2.1.4 产 β-甘露聚糖酶菌株的复筛 | 第27-28页 |
| 2.1.5 β-甘露聚糖酶分布 | 第28页 |
| 2.1.6 实验菌株生长曲线 | 第28页 |
| 2.1.7 实验菌株DNA的提取 | 第28页 |
| 2.1.8 菌株 16S rDNA扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.9 系统发育树的构建 | 第29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-39页 |
| 2.2.1 甘露糖标准曲线 | 第29页 |
| 2.2.2 椰肉表面消毒 | 第29-31页 |
| 2.2.3 椰果内生细菌分离结果 | 第31-32页 |
| 2.2.4 内生细菌 16S rDNA扩增结果 | 第32-35页 |
| 2.2.5 产 β-甘露聚糖酶菌株的初筛 | 第35-36页 |
| 2.2.6 产 β-甘露聚糖酶菌株的复筛 | 第36-37页 |
| 2.2.7 β-甘露聚糖酶的分布 | 第37页 |
| 2.2.8 实验菌株的生长曲线 | 第37页 |
| 2.2.9 实验菌株的鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.10 菌株YZ-21 系统发育树的构建 | 第39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-43页 |
| 第三章 实验菌株发酵条件的优化 | 第43-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 材料 | 第43页 |
| 3.1.2 培养基 | 第43页 |
| 3.1.3 培养条件对菌株产酶的影响 | 第43-44页 |
| 3.1.4 菌株产酶培养基的优化 | 第44-46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-52页 |
| 3.2.1 培养条件对菌株产酶的影响 | 第46-48页 |
| 3.2.2 培养基对菌株产酶的影响 | 第48-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 酶的纯化及酶学特性研究 | 第53-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53页 |
| 4.1.1 材料 | 第53页 |
| 4.2 β-甘露聚糖酶的纯化 | 第53-54页 |
| 4.2.1 乙醇沉淀 | 第53页 |
| 4.2.2 硫酸铵盐析 | 第53页 |
| 4.2.3 双水相萃取 | 第53-54页 |
| 4.3 β-甘露聚糖酶酶学特性研究 | 第54-55页 |
| 4.3.1 温度对酶活的影响 | 第54页 |
| 4.3.2 温度对酶稳定性的影响 | 第54页 |
| 4.3.3 pH对酶活的影响 | 第54页 |
| 4.3.4 pH对酶稳定性的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.5 金属离子和EDTA对酶活的影响 | 第55页 |
| 4.3.6 底物特异性 | 第55页 |
| 4.3.7 酶动力常数的测定 | 第55页 |
| 4.4 结果与分析 | 第55-63页 |
| 4.4.1 乙醇沉淀法 | 第55-56页 |
| 4.4.2 硫酸铵盐析法 | 第56页 |
| 4.4.3 双水相萃取法 | 第56-58页 |
| 4.4.4 三种分离方法对酶分离的影响 | 第58页 |
| 4.4.5 温度对酶稳定性的影响 | 第58-60页 |
| 4.4.6 pH对酶活的影响 | 第60页 |
| 4.4.7 pH对酶稳定性的影响 | 第60页 |
| 4.4.8 金属离子和EDTA对 β-甘露聚糖酶活的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.9 β-甘露聚糖酶底物特异性 | 第61-62页 |
| 4.4.10 β-甘露聚糖酶酶动力常数 | 第62-63页 |
| 4.5 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 产酶基因的克隆、表达及重组酶研究 | 第65-79页 |
| 5.1 材料与方法 | 第65-71页 |
| 5.1.1 材料 | 第65页 |
| 5.1.2 基因组DNA的提取 | 第65页 |
| 5.1.3 β-甘露聚糖酶基因片段的克隆 | 第65-67页 |
| 5.1.4 目的基因与表达载体pET-32a（+）连接及基因工程菌的构建 | 第67-69页 |
| 5.1.5 manA基因在E.coli BL 21 中的诱导表达 | 第69页 |
| 5.1.6 重组 β-甘露聚糖酶的SDS-PAGE电泳分析 | 第69页 |
| 5.1.7 重组 β-甘露聚糖酶酶学性质的测定 | 第69-71页 |
| 5.2 结果与分析 | 第71-78页 |
| 5.2.1 YZ-21 基因片段的克隆和序列分析 | 第71-72页 |
| 5.2.2 基因片段manA蛋白三维结构分析 | 第72-75页 |
| 5.2.3 原核表达载体的构建 | 第75页 |
| 5.2.4 重组蛋白诱导表达 | 第75-76页 |
| 5.2.5 重组 β-甘露聚糖酶酶学性质 | 第76-78页 |
| 5.3 讨论 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第91-92页 |
