| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-14页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌概述 | 第8页 |
| 1.2 铜绿假单胞菌疫苗 | 第8-10页 |
| 1.2.1 灭活疫苗 | 第8-9页 |
| 1.2.2 减毒活疫苗 | 第9页 |
| 1.2.3 DNA疫苗 | 第9页 |
| 1.2.4 结合疫苗 | 第9-10页 |
| 1.3 免疫佐剂 | 第10-14页 |
| 1.3.1 矿物质类佐剂 | 第11页 |
| 1.3.2 弗氏佐剂 | 第11页 |
| 1.3.3 免疫刺激复合物及基质 | 第11-12页 |
| 1.3.4 细胞因子佐剂 | 第12页 |
| 1.3.5 多糖佐剂 | 第12页 |
| 1.3.6 人参皂苷佐剂 | 第12-14页 |
| 第二章 水貂铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF、OprI及OprF/I基因的克隆及表达 | 第14-26页 |
| 2.1 材料与方法 | 第14-21页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第14页 |
| 2.1.4 引物设计及合成 | 第14-17页 |
| 2.1.5 基因片段OprF、OprI、OprF’、OprI’的PCR扩增 | 第17页 |
| 2.1.6 基因片段OprF、OprI、OprF’、OprI’ PCR产物的回收 | 第17-18页 |
| 2.1.7 基因片段OprF/I的PCR扩增 | 第18页 |
| 2.1.8 基因片段OprF/I PCR产物的回收 | 第18页 |
| 2.1.9 重组克隆质粒的构建 | 第18页 |
| 2.1.10 重组克隆质粒转化E.coli TransT1 | 第18页 |
| 2.1.11 重组克隆质粒的提取 | 第18页 |
| 2.1.12 重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第18页 |
| 2.1.13 重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第18-19页 |
| 2.1.14 重组克隆质粒的测序鉴定 | 第19页 |
| 2.1.15 重组表达质粒的构建 | 第19页 |
| 2.1.16 重组表达质粒转化E.coli Trans T1 | 第19-20页 |
| 2.1.17 重组表达质粒的提取 | 第20页 |
| 2.1.18 重组表达质粒的PCR鉴定 | 第20页 |
| 2.1.19 重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第20页 |
| 2.1.20 重组表达质粒的测序鉴定 | 第20页 |
| 2.1.21 重组表达质粒转化BL21 | 第20页 |
| 2.1.22 重组表达质粒的提取与鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.2.1 基因片段OprF、OprI、OprF/I的扩增 | 第21页 |
| 2.2.2 重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 重组克隆质粒的测序鉴定 | 第23页 |
| 2.2.5 重组表达质粒的PCR鉴定 | 第23页 |
| 2.2.6 重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.7 重组表达质粒的测序鉴定 | 第24页 |
| 2.3 讨论 | 第24-25页 |
| 2.4 本章小结 | 第25-26页 |
| 第三章 水貂铜绿假单胞菌外膜蛋白的原核表达及纯化 | 第26-34页 |
| 3.1 材料与方法 | 第26-28页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 3.1.3 重组原核表达质粒在大肠杆菌中最适表达条件的筛选 | 第26-27页 |
| 3.1.4 SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| 3.1.5 OprF/I、OprF、OprI的大量表达 | 第28页 |
| 3.1.6 OprF/I、OprF、OprI的分离纯化 | 第28页 |
| 3.1.7 Western blot分析 | 第28页 |
| 3.2 结果与分析 | 第28-32页 |
| 3.2.1 重组原核表达质粒在大肠杆菌中最适表达条件的研究 | 第28-31页 |
| 3.2.2 纯化产物OprF/I、OprF、OprI的SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| 3.2.3 Western blot分析 | 第32页 |
| 3.3 讨论 | 第32-33页 |
| 3.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 第四章 铜绿假单胞菌外膜蛋白及全菌间接ELISA方法的初步建立与比较 | 第34-43页 |
| 4.1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第34页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第34页 |
| 4.1.3 试验方法 | 第34-36页 |
| 4.2 结果与分析 | 第36-41页 |
| 4.2.1 抗原浓度测定 | 第36页 |
| 4.2.2 间接ELISA最佳反应条件 | 第36-41页 |
| 4.3 讨论 | 第41-42页 |
| 4.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第五章 铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF/I的免疫效果评价 | 第43-49页 |
| 5.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 5.1.1 试验仪器 | 第43页 |
| 5.1.2 主要试剂及实验动物 | 第43页 |
| 5.1.3 抗原制备 | 第43页 |
| 5.1.4 动物分组及免疫程序 | 第43-44页 |
| 5.1.5 小鼠血清的抗体检测 | 第44页 |
| 5.1.6 数据的统计与分析 | 第44-45页 |
| 5.2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 5.3 讨论 | 第47-48页 |
| 5.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
