| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 干细胞因子SALL4 | 第14-20页 |
| 1.1.1 SALL4的基本生物学性质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 SALL4与干细胞和发育 | 第15-16页 |
| 1.1.3 SALL4在肿瘤中的作用 | 第16-18页 |
| 1.1.4 SALL4作用的分子机制 | 第18-20页 |
| 1.2 细胞表面粘附分子CD44 | 第20-22页 |
| 1.2.1 CD44的结构 | 第20-21页 |
| 1.2.2 CD44在胃癌中的作用 | 第21-22页 |
| 1.2.3 CD44的表达调控 | 第22页 |
| 1.3 小结 | 第22-24页 |
| 第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义 | 第24-27页 |
| 2.1 研究目的 | 第24页 |
| 2.2 研究方法 | 第24-25页 |
| 2.3 实验设计方案 | 第25-26页 |
| 2.4 研究意义 | 第26-27页 |
| 第三章 shRNA干扰SALL4表达对胃癌细胞生物学特性的影响 | 第27-43页 |
| 3.1 材料 | 第27-30页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第27页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第27-29页 |
| 3.1.3 主要仪器和耗材 | 第29-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-36页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 3.2.2 慢病毒转染 | 第30页 |
| 3.2.3 总RNA提取及逆转录PCR | 第30-31页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR | 第31页 |
| 3.2.5 总蛋白提取 | 第31-32页 |
| 3.2.6 Western blot | 第32页 |
| 3.2.7 细胞生长曲线 | 第32-33页 |
| 3.2.8 平板克隆形成测定 | 第33页 |
| 3.2.9 细胞划痕实验 | 第33页 |
| 3.2.10 Transwell细胞迁移实验 | 第33页 |
| 3.2.11 Tet-On诱导系统慢病毒载体构建及诱导 | 第33-35页 |
| 3.2.12 统计分析 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-41页 |
| 3.3.1 MGC-803细胞直接干扰SALL4效率鉴定 | 第36页 |
| 3.3.2 直接干扰SALL4表达对MGC-803细胞体外增殖能力的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.3 直接干扰SALL4表达对MGC-803细胞体外迁移能力的影响 | 第37-39页 |
| 3.3.4 Tet-On系统介导SALL4干扰效率验证 | 第39页 |
| 3.3.5 Tet-On系统介导SALL4干扰对MGC-803细胞体外增殖能力的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.6 Tet-On系统介导SALL4干扰对MGC-803细胞体外迁移能力的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 胃癌细胞中SALL4对CD44的转录调控作用 | 第43-55页 |
| 4.1 材料 | 第43-45页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.3 主要仪器及相关耗材 | 第44-45页 |
| 4.2 方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第45页 |
| 4.2.2 慢病毒转染 | 第45页 |
| 4.2.3 总RNA提取及逆转录PCR | 第45页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR | 第45页 |
| 4.2.5 总蛋白提取 | 第45页 |
| 4.2.6 Western blot | 第45页 |
| 4.2.7 CD44启动子区域荧光素酶报告基因载体构建 | 第45-46页 |
| 4.2.8 荧光素酶报告基因分析 | 第46-47页 |
| 4.2.9 ChIP | 第47-48页 |
| 4.2.10 统计分析 | 第48页 |
| 4.3 结果 | 第48-52页 |
| 4.3.1 MGC-803细胞中SALL4对下游靶基因表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.2 MGC-803细胞中SALL4对关键肿瘤信号通路的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.3 SALL4调控CD44荧光素酶报告基因活性 | 第50-51页 |
| 4.3.4 SALL4蛋白结合CD44启动子区域 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第五章 SALL4转录激活CD44表达对胃癌细胞体内外生物学特性的影响 | 第55-63页 |
| 5.1 材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第55页 |
| 5.1.2 细胞株 | 第55页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 5.1.4 主要仪器和耗材 | 第55-56页 |
| 5.2 方法 | 第56-58页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第56页 |
| 5.2.2 慢病毒转染 | 第56页 |
| 5.2.3 总蛋白提取 | 第56页 |
| 5.2.4 Western blot | 第56页 |
| 5.2.5 生长曲线测定 | 第56页 |
| 5.2.6 平板克隆形成测定 | 第56页 |
| 5.2.7 细胞划痕实验 | 第56-57页 |
| 5.2.8 Transwell细胞迁移实验 | 第57页 |
| 5.2.9 裸鼠皮下荷瘤模型 | 第57页 |
| 5.2.10 免疫组织化学染色 | 第57-58页 |
| 5.2.11 肿瘤组织病理分析 | 第58页 |
| 5.2.12 统计分析 | 第58页 |
| 5.3 结果 | 第58-62页 |
| 5.3.1 MGC-803 SALL4干扰细胞株CD44回补效率鉴定 | 第58页 |
| 5.3.2 CD44回补对SALL4干扰细胞株体外增殖能力的影响 | 第58-59页 |
| 5.3.3 CD44回补对SALL4干扰细胞株体外迁移能力的影响 | 第59-60页 |
| 5.3.4 SALL4干扰及CD44回补对MGC-803细胞裸鼠体内成瘤能力影响 | 第60-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 6.1 结论 | 第63页 |
| 6.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的科研成果及参加会议 | 第74-75页 |
| 一、科研成果 | 第74页 |
| 二、参加会议 | 第74-75页 |
| 三、获奖情况 | 第75页 |
