| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 植物的抗病反应机制 | 第10-12页 |
| 1.1.1 植物的免疫屏障 | 第10-11页 |
| 1.1.2 信号分子介导的抗病信号途径 | 第11-12页 |
| 1.3 miRNA研究概况 | 第12-14页 |
| 1.3.1 miRNA简介 | 第12页 |
| 1.3.2 miRNA的主要功能 | 第12-13页 |
| 1.3.3 miRNA家族不同成员的功能差异 | 第13页 |
| 1.3.4 过表达方法研究miRNA的功能 | 第13-14页 |
| 1.3.5 番茄miRNA功能的概述 | 第14页 |
| 1.4 miR172在植物抗病中的作用 | 第14-17页 |
| 1.4.1 miR172的保守性 | 第14-15页 |
| 1.4.2 miR172的靶基因 | 第15-16页 |
| 1.4.3 miR172在植物生物胁迫中的作用 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 番茄miR172的生物信息学及表达模式分析 | 第18-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 数据库 | 第18页 |
| 2.1.2 生物信息学分析软件 | 第18页 |
| 2.1.3 生物材料 | 第18-19页 |
| 2.2 实验试剂及仪器 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 番茄miR172a/b的生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 2.3.2 胁迫条件下番茄miR172a/b及靶基因的表达模式分析 | 第20-23页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第23-33页 |
| 2.4.1 miR172a/b序列的同源比对 | 第23-24页 |
| 2.4.2 番茄中miR172a/b的靶基因 | 第24-25页 |
| 2.4.3 miR172a/b启动子区的顺式作用元件 | 第25-26页 |
| 2.4.4 番茄总RNA的质量及纯度分析 | 第26-27页 |
| 2.4.5 目的基因的溶解曲线和标准曲线 | 第27-28页 |
| 2.4.6 胁迫条件下miR172a/b及靶基因的表达模式 | 第28-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 小结 | 第34-35页 |
| 3 过表达载体的构建及对番茄的转化 | 第35-51页 |
| 3.1 实验材料及试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.2 实验试剂及仪器 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-44页 |
| 3.2.1 番茄基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.2.2 MIR172前体基因的克隆 | 第37-41页 |
| 3.2.3 MIR172过表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.4 农杆菌工程菌的制备 | 第42-43页 |
| 3.2.5 miR172对番茄的遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.2.6 番茄再生植株的分子检测 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 3.3.1 提取的番茄基因组DNA | 第44-45页 |
| 3.3.2 MIR172a的PCR克隆结果 | 第45页 |
| 3.3.3 构建的pMD-19T-MIR172a重组质粒 | 第45-46页 |
| 3.3.4 构建的pBI121-MIR172a融合质粒载体 | 第46-47页 |
| 3.3.5 获得的农杆菌工程菌 | 第47-48页 |
| 3.3.6 获得的番茄再生植株 | 第48页 |
| 3.3.7 番茄再生植株的分子检测结果 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 4 miR172a/b转基因番茄的抗病功能分析 | 第51-62页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.2 实验试剂及仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.2.1 病原菌的培养和孢子的收集 | 第52页 |
| 4.2.2 病原菌接种离体番茄叶片 | 第52页 |
| 4.2.3 番茄病情指数的统计 | 第52-53页 |
| 4.2.4 病原菌处理后植物体内生理指标的测定 | 第53-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-60页 |
| 4.3.1 转基因番茄对致病疫霉菌的抗性分析 | 第56-59页 |
| 4.3.2 转基因番茄对灰霉病菌的抗性分析 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-61页 |
| 4.5 小结 | 第61-62页 |
| 结 论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录A 培养基配制方法 | 第68-70页 |
| 附录B 论文中所用质粒图谱 | 第70-71页 |
| 附录C 基因序列 | 第71-72页 |
| 附录D 电泳用DNA Marker | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
