| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-29页 |
| 1.1 葡萄糖脱氢酶的研究 | 第12-18页 |
| 1.1.1 葡萄糖脱氢酶的来源与分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 PQQ-GDH的分离纯化与研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2 膜蛋白质的分离纯化技术 | 第18-27页 |
| 1.2.1 膜蛋白的分类与定义 | 第18-19页 |
| 1.2.2 膜蛋白的提取技术 | 第19-26页 |
| 1.2.3 层析技术 | 第26-27页 |
| 1.3 选题意义 | 第27-28页 |
| 1.4 研究的主要内容 | 第28-29页 |
| 第二章 球形节杆菌C224 mGDH的分离纯化 | 第29-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 菌种 | 第30页 |
| 2.1.2 培养基 | 第30页 |
| 2.1.3 试剂与材料 | 第30-32页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.2.1 斜面培养 | 第33页 |
| 2.2.2 菌种扩大培养 | 第33页 |
| 2.2.3 细胞收集 | 第33页 |
| 2.2.4 超声波破碎细胞 | 第33页 |
| 2.2.5 Triton X-114 相分离法提取膜蛋白 | 第33-34页 |
| 2.2.6 丙酮沉淀 | 第34页 |
| 2.2.7 聚乙二醇沉淀 | 第34-35页 |
| 2.2.8 乙醇沉淀 | 第35页 |
| 2.2.9 Hydroxyapatite Fast Flow吸附层析 | 第35页 |
| 2.2.10 细胞浓度（OD650值）的测定 | 第35页 |
| 2.2.11 葡萄糖的测定 | 第35页 |
| 2.2.12 2KGA的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.13 mGDH酶活力的测定 | 第36-38页 |
| 2.2.14 蛋白浓度测定 | 第38页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第38-47页 |
| 2.3.1 不同生长时期球形节杆菌C224 细胞中mGDH的相对活性 | 第38-39页 |
| 2.3.2 超声功率和时间对提取mGDH的影响 | 第39-42页 |
| 2.3.3 pH和盐离子浓度对两相分离法的影响 | 第42-43页 |
| 2.3.4 两相分离法提取膜蛋白过程中mGDH在两相的分配 | 第43-44页 |
| 2.3.5 丙酮沉淀对纯化mGDH的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.6 Hydroxyapatite Fast Flow吸附层析 | 第45-46页 |
| 2.3.7 球形节杆菌C224 mGDH的纯化结果 | 第46-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 利用SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS鉴定球形节杆菌C224 mGDH | 第49-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 试剂与材料 | 第50-51页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 3.2.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第51-52页 |
| 3.2.2 MALDI-TOF-MS分析 | 第52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 3.3.1 球形节杆菌C224 mGDH的SDS-PAGE图谱 | 第52-53页 |
| 3.3.2 来源于球形节杆菌C224 的mGDH的MALDI-TOF-MS鉴定 | 第53-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 球形节杆菌C224 mGDH的酶学性质 | 第59-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.1.1 试剂与材料 | 第59-61页 |
| 4.1.2 实验仪器与设备 | 第61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 mGDH的制备及酶活力测定 | 第61页 |
| 4.2.2 mGDH的最适反应pH值与pH稳定性 | 第61-62页 |
| 4.2.3 mGDH的最适反应温度与热稳定性 | 第62页 |
| 4.2.4 mGDH的底物特异性 | 第62页 |
| 4.2.5 金属离子和金属螯合剂EDTA对mGDH的作用 | 第62页 |
| 4.2.6 有机溶剂对mGDH的作用 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 4.3.1 mGDH的最适反应pH值与pH稳定性 | 第63-64页 |
| 4.3.2 mGDH的最适反应温度与热稳定性 | 第64-66页 |
| 4.3.3 mGDH的底物特异性 | 第66页 |
| 4.3.4 金属离子和金属螯合剂EDTA对mGDH的作用 | 第66-68页 |
| 4.3.5 有机溶剂对mGDH的作用 | 第68-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第五章 球形节杆菌C224 mGDH的酶促反应动力学 | 第71-85页 |
| 5.1 实验材料 | 第72页 |
| 5.1.1 试剂与材料 | 第72页 |
| 5.1.2 仪器与设备 | 第72页 |
| 5.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 5.2.1 mGDH的制备及酶活测定方法 | 第72-73页 |
| 5.2.2 单底物酶促反应动力学 | 第73页 |
| 5.2.3 双底物酶促反应动力学 | 第73页 |
| 5.2.4 产物抑制动力学的研究 | 第73页 |
| 5.2.5 数据分析 | 第73-74页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第74-84页 |
| 5.3.1 单底物的酶促反应动力学 | 第74-77页 |
| 5.3.2 双底物的酶促反应动力学 | 第77-80页 |
| 5.3.3 产物抑制动力学的研究 | 第80-82页 |
| 5.3.4 不同微生物来源的GDH的酶学性质和动力学性质 | 第82-84页 |
| 5.4 本章小结 | 第84-85页 |
| 第六章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 6.1 全文主要结论 | 第85-86页 |
| 6.2 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第97页 |
