| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 中英文缩略语对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 生殖系统以及类固醇生成 | 第13-24页 |
| 1.1 下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴 | 第13-14页 |
| 1.2 卵巢和卵子发生 | 第14-17页 |
| 1.2.1 卵巢 | 第14页 |
| 1.2.2 卵子发生 | 第14-17页 |
| 1.3 精巢和精子发生 | 第17-22页 |
| 1.3.1 精巢 | 第17-20页 |
| 1.2.2 精子发生 | 第20-22页 |
| 1.4 配子发生过程中的类固醇激素生成 | 第22-24页 |
| 2 GATA家族 | 第24-31页 |
| 2.1 GATA家族成员的结构以及功能 | 第24-26页 |
| 2.2 Gata4/6的研究现状 | 第26-31页 |
| 2.2.1 Gata4/6在性腺的表达 | 第26-28页 |
| 2.2.2 Gata4/6在性腺的功能研究 | 第28-29页 |
| 2.2.3 Gata4/6与类固醇生成 | 第29-31页 |
| 3 科学问题的提出和本研究的目的意义 | 第31-33页 |
| 第二章 GATA6性腺表达初步研究 | 第33-45页 |
| 1 引言 | 第33-34页 |
| 2 实验材料和仪器 | 第34-39页 |
| 2.1 实验动物 | 第34页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 有关试剂的配制 | 第35页 |
| 2.4 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.4.1 罗非鱼性腺总RNA提取 | 第35页 |
| 2.4.2 cDNA的合成 | 第35-36页 |
| 2.4.3 性腺Gata6表达分析 | 第36-38页 |
| 2.4.3.1 Gata6 mRNA在性腺不同发育阶段的表达 | 第36-38页 |
| 2.4.3.2 性腺转录组Gata6表达分析 | 第38页 |
| 2.4.4 Gata6多克隆抗体制备检测 | 第38-39页 |
| 2.4.4.1 Gata6重组蛋白表达、检测和纯化 | 第38-39页 |
| 2.4.4.2 Gata6多克隆抗体制备 | 第39页 |
| 2.4.4.3 Gata6 Western blot检测 | 第39页 |
| 2.4.4.4 Gata6在性腺组织中的免疫组化检测 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| 3.1 Gata6在不同时期性腺中的表达 | 第39-41页 |
| 3.2 Gata6抗体检测以及细胞定位 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 Gata6在性腺中的表达 | 第43页 |
| 4.2 Gata6在雌雄性腺的细胞定位 | 第43-45页 |
| 第三章 GATA4/6功能的初步研究 | 第45-65页 |
| 1 引言 | 第45-46页 |
| 2 实验材料和仪器 | 第46-49页 |
| 2.1 实验动物 | 第46页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第46页 |
| 2.3 有关试剂的配制 | 第46页 |
| 2.4 实验方法 | 第46-49页 |
| 2.4.1 罗非鱼 gtzto4/6(JCRISPR/Cas9 敲除 | 第46-49页 |
| 2.4.1.1 敲除靶向序列的选择 | 第46-47页 |
| 2.4.1.2 gRNA和Cas9 mRNA的合成 | 第47页 |
| 2.4.1.3 显微注射 | 第47页 |
| 2.4.1.4 基因组DNA的提取、目的片段的扩增及酶切检测 | 第47-48页 |
| 2.4.1.5 敲除阳性鱼的筛选 | 第48页 |
| 2.4.1.6 组织学检测 | 第48页 |
| 2.4.1.7 免疫组化 | 第48页 |
| 2.4.1.8 real-time PCR和RT-PCR | 第48页 |
| 2.4.1.9 激素测定 | 第48页 |
| 2.4.1.10 统计卵母细胞时相 | 第48页 |
| 2.4.1.11 数据统计 | 第48-49页 |
| 2.4.2 gata6突变F1代建立 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-62页 |
| 3.1 敲除序列的选择以及突变检测 | 第49-51页 |
| 3.2 阳性敲除鱼的筛选和敲除效率统计 | 第51-53页 |
| 3.3 Gata4/6缺失对雌鱼性腺基因表达和血清激素水平的影响 | 第53-56页 |
| 3.4 Gata4/6缺失对雄鱼性腺基因表达和血清激素水平的影响 | 第56-61页 |
| 3.5 Gata6突变F1代鱼检测 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9高效敲除Gata4/6 | 第62页 |
| 4.2 Gata4/6参与类固醇生成和雌雄配子生成 | 第62-64页 |
| 4.3 Gata4/6功能上的相关性和互补性 | 第64页 |
| 4.4 脊椎动物Gata4/6在进化上功能的一致性 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 在读期间所发表的文章 | 第79页 |
| 在读期间参加科研情况 | 第79页 |
