摘要 | 第6-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
文献综述 | 第11-24页 |
第一章 体细胞核移植与重编程 | 第11-18页 |
1.1 核移植诱导重编程 | 第11-14页 |
1.2 细胞融合与重编程 | 第14-15页 |
1.3 基于组蛋白修饰的技术革新 | 第15-16页 |
1.4 组蛋白去乙酰化酶抑制剂促进重编程的分子机制 | 第16页 |
1.5 基因组的重编程需要组蛋白去乙酰化酶抑制剂的参与 | 第16-18页 |
第二章 哺乳动物体细胞核移植研究进展 | 第18-24页 |
2.1 影响体细胞克隆牛效率的因素概述 | 第18页 |
2.2 卵母细胞来源与质量 | 第18-19页 |
2.3 细胞周期 | 第19-20页 |
2.4 细胞类型与供核细胞的体外培养 | 第20页 |
2.5 重构胚融合与激活的时间 | 第20-21页 |
2.6 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI) | 第21-22页 |
2.7 胚胎聚合 | 第22-23页 |
2.8 其它因素 | 第23-24页 |
试验内容 | 第24-47页 |
第三章 梅花鹿-牛种间重构胚培养体系的建立 | 第24-34页 |
3.1 材料试剂 | 第25-26页 |
3.1.1 主要仪器 | 第25页 |
3.1.2 主要试剂 | 第25页 |
3.1.3 主要溶液配制 | 第25-26页 |
3.1.4 主要耗材 | 第26页 |
3.2 试验方法 | 第26-29页 |
3.2.1 牛卵母细胞的收集 | 第26页 |
3.2.2 卵母细胞的体外成熟 | 第26页 |
3.2.3 体细胞克隆胚胎的制备 | 第26-29页 |
3.2.4 数据分析 | 第29页 |
3.3 结果 | 第29-32页 |
3.3.1 核供体细胞的获得 | 第29页 |
3.3.2 牛卵母细胞的获得及成熟 | 第29-30页 |
3.3.3 供体细胞对种间重构胚卵裂率的影响 | 第30页 |
3.3.4 融合电压对种间克隆胚胎卵裂率的影响 | 第30-31页 |
3.3.5 培养基对种间重构胚卵裂率及囊胚率的影响 | 第31-32页 |
3.4 讨论 | 第32-33页 |
3.5 小结 | 第33-34页 |
第四章 TSA对种间核移植效率的影响 | 第34-47页 |
4.1 材料试剂 | 第35-36页 |
4.1.1 主要仪器 | 第35页 |
4.1.2 主要试剂 | 第35页 |
4.1.3 主要溶液配制 | 第35-36页 |
4.1.4 主要耗材 | 第36页 |
4.2 试验方法 | 第36-39页 |
4.2.1 牛卵母细胞的收集 | 第36页 |
4.2.2 卵母细胞的体外成熟 | 第36页 |
4.2.3 梅花鹿胎儿成纤维细胞转pEGFP-N1细胞的构建 | 第36-38页 |
4.2.4 TSA处理转pEGFP-N1胎儿成纤维细胞的H4K5免疫荧光染色 | 第38页 |
4.2.5 重构胚的融合 | 第38页 |
4.2.6 TSA处理重构胚 | 第38页 |
4.2.7 统计学分析 | 第38-39页 |
4.3 结果 | 第39-45页 |
4.3.1 G418筛选浓度 | 第39页 |
4.3.2 转pEGFP-N1梅花鹿胎儿成纤维细胞的构建 | 第39-40页 |
4.3.3 转pEGFP-N1梅花鹿胎儿成纤维细胞与梅花鹿胎儿成纤维细胞克隆效率比较 | 第40-41页 |
4.3.4 TSA对梅花鹿胎儿成纤维细胞的影响 | 第41页 |
4.3.5 TSA浓度对H4K5蛋白表达的影响 | 第41-43页 |
4.3.6 TSA对种间克隆胚胎发育的影响 | 第43页 |
4.3.7 TSA处理提高了种间克隆胚胎的重编程效率 | 第43-45页 |
4.4 讨论 | 第45-46页 |
4.5 小结 | 第46-47页 |
结论 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-60页 |
附录 | 第60-62页 |
致谢 | 第62-63页 |
作者简介 | 第63页 |