| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英汉缩略词对照表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 临床样本筛查分析HBV S基因新增N-糖基化突变 | 第17-26页 |
| 1.1 实验材料与仪器 | 第17-18页 |
| 1.1.1 研究对象 | 第17页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第17-18页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 1.2 实验方法 | 第18-22页 |
| 1.2.1 血清中HBV DNA的提取 | 第18-19页 |
| 1.2.2 巢式PCR扩增HBV S区序列 | 第19-22页 |
| 1.2.2.1 第一轮PCR扩增 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 PCR产物电泳检测 | 第20页 |
| 1.2.2.3 第2轮PCR扩增 | 第20-22页 |
| 1.2.2.4 PCR产物的电泳检测 | 第22页 |
| 1.2.3 测序及分析 | 第22页 |
| 1.2.4 统计学方法 | 第22页 |
| 1.3 结果 | 第22-23页 |
| 1.3.1 巢式PCR扩增结果 | 第22-23页 |
| 1.3.2 HBV S区基因新增N-糖基化突变临床数据分析结果 | 第23页 |
| 1.4 结论 | 第23-24页 |
| 1.5 讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 HBsAg+抗HBs双阳性伴S区新增双N-糖基化突变临床意义分析的实验研究 | 第26-69页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第26-29页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.3 研究对象 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-56页 |
| 2.2.1 巢式PCR扩增HBV前S/S序列 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 巢式第1轮PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 第2轮PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 PCR产物的检测 | 第31页 |
| 2.2.2 HBV前S/S区序列的克隆及测序分析 | 第31-36页 |
| 2.2.2.1 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 2.2.2.2 PCR产物末端加A | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 与T载体连接 | 第33页 |
| 2.2.2.4 转化 | 第33-34页 |
| 2.2.2.5 挑菌及摇菌 | 第34页 |
| 2.2.2.6 菌液PCR | 第34-35页 |
| 2.2.2.7 PCR产物电泳检测 | 第35页 |
| 2.2.2.8 测序分析 | 第35-36页 |
| 2.2.2.9 小提质粒 | 第36页 |
| 2.2.3 定点突变 | 第36-38页 |
| 2.2.3.1 PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 PCR产物的消化 | 第38页 |
| 2.2.3.3 转化 | 第38页 |
| 2.2.3.4 其他 | 第38页 |
| 2.2.4 pTriEx-mod-1.1 HBV重组载体构建 | 第38-45页 |
| 2.2.4.1 双酶切 | 第39-40页 |
| 2.2.4.2 胶回收 | 第40页 |
| 2.2.4.3 连接 | 第40-41页 |
| 2.2.4.4 转化 | 第41页 |
| 2.2.4.5 p TriEx+pre S/S阳性重组子的筛选 | 第41-43页 |
| 2.2.4.6 甘油保菌 | 第43页 |
| 2.2.4.7 转染级质粒的提取及浓度测定 | 第43-45页 |
| 2.2.5 pTriEx-mod-1.1 HBV重组质粒瞬时转染细胞及检测分析 | 第45-48页 |
| 2.2.5.1 瞬时转染 | 第45-46页 |
| 2.2.5.2 细胞上清中HBsAg及HBV DNA绝对定量检测 | 第46-47页 |
| 2.2.5.3 细胞内中间复制体提取及绝对定量 | 第47-48页 |
| 2.2.6 pcDNA3.1/myc-His(-) A+S基因重组载体构建 | 第48-52页 |
| 2.2.6.1 PCR扩增HBV S区基因 | 第49-50页 |
| 2.2.6.2 PCR产物纯化 | 第50页 |
| 2.2.6.3 双酶切及胶回收纯化 | 第50-51页 |
| 2.2.6.4 连接 | 第51页 |
| 2.2.6.5 转化 | 第51页 |
| 2.2.6.6 阳性重组子的筛选 | 第51页 |
| 2.2.6.7 甘油保菌 | 第51页 |
| 2.2.6.8 转染质粒的提取及浓度测定 | 第51-52页 |
| 2.2.7 pc DNA3.1/myc-His(-) A+S基因重组质粒瞬时转染细胞及检测分析 | 第52-56页 |
| 2.2.7.1 瞬时转染 | 第52页 |
| 2.2.7.2 蛋白定量 | 第52-53页 |
| 2.2.7.3 Western Blotting检测细胞内HBV S融合蛋白表达 | 第53-55页 |
| 2.2.7.4 HBV S融合蛋白的去糖基化 | 第55-56页 |
| 2.2.7.5 免疫荧光检测细胞内HBV S融合蛋白表达 | 第56页 |
| 2.3 结果 | 第56-65页 |
| 2.3.1 pEASY-T+preS/S克隆构建及序列分析结果 | 第56-58页 |
| 2.3.2 定点突变结果 | 第58-59页 |
| 2.3.3 p Tri Ex+pre S/S重组质粒构建及检测结果 | 第59-62页 |
| 2.3.3.1 p TriEx+pre S/S重组质粒构建 | 第59-60页 |
| 2.3.3.2 细胞内HBV复制中间体与培养上清HBV DNA定量检测 | 第60-61页 |
| 2.3.3.3 细胞培养上清中HBsAg定量 | 第61-62页 |
| 2.3.4 pcDNA3.1/myc-His(-) A+HBV S基因重组质粒构建与检测 | 第62-65页 |
| 2.3.4.1 pcDNA3.1 真核表达重组质粒构建 | 第62-63页 |
| 2.3.4.2 HBV S区融合蛋白的Western Blotting分析 | 第63-64页 |
| 2.3.4.3 免疫荧光检测结果 | 第64-65页 |
| 2.4 结论 | 第65-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66-69页 |
| 第三部分 总结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录（综述） | 第76-89页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
